[发明专利]一种长牡蛎engrailed2启动子及其重组表达载体及应用

说明书

本发明涉及分子生物学技术，具体的说是一种长牡蛎engrailed 2启动子及其重组表达载体及应用。启动子为SEQ ID No.1所示的碱基序列。所述启动子为与SEQ ID No.1所示的碱基序列具有80％或80％以上同源性的碱基序列，且具有启动子功能。所述启动子在制备重组表达载体中的应用。通过注射重组表达载体，启动目的基因，实现目的基因在贝类幼虫中的表达。

技术领域

本发明涉及分子生物学技术，具体的说是一种长牡蛎engrailed 2 启动子及其重组表达载体及应用。

背景技术

在软体动物早期发育研究中，目前尚无可用的启动子。软体动物 engrailed为具有homedomain的转录因子，在神经系统及贝壳的发育过程中起重要作用。engrailed启动子可以在贝类幼虫中驱动报告基因的表达，为软体动物的发育研究提供便利。

发明内容

本发明的目的在于提供一种长牡蛎engrailed 2启动子及其重组表达载体及应用。

为实现上述目的，本发明采用技术方案为：

一种长牡蛎engrailed 2启动子，启动子为SEQ ID No.1所示的碱基序列。

所述启动子为与SEQ ID No.1所示的碱基序列具有80％或80％以上同源性的碱基序列，且具有启动子功能。

一种长牡蛎engrailed 2启动子的应用，所述启动子在制备重组表达载体中的应用。

一种长牡蛎engrailed 2启动子的应用，所述启动子在贝类幼虫中启动目的基因表达。

所述目的基因为可在细胞中转录或翻译的功能基因或RNA序列，如编码蛋白的各种功能基因(如EGFP)、反义RNA或其它具有调节功能的长 RNA序列(如LnRNA)，在本例应用中是EGFP。

含所述的长牡蛎engrailed 2启动子的重组表达载体。

一种含长牡蛎engrailed 2启动子的重组表达载体的应用，所述重组表达载体在贝类幼虫中启动目的基因表达中的应用。

本发明所具有的优点：

通过注射重组表达载体，启动目的基因，实现目的基因在贝类幼虫中的表达。

附图说明

图1为本发明实施例提供的pEGFP-1质粒示意图。

图2为本发明实施例提供的pEGFP-1质粒中的多克隆位点图。

图3为本发明实施例提供的注射重组载体的笠贝早期幼虫中 engrailed 2启动子驱动GFP表达的结果图，其中，绿色荧光出现在幼虫中。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明做进一步解释说明。

实施例1

启动子扩增：

使用海洋动物组织基因组DNA提取试剂盒(TIANGEN，目录号：DP324)提取长牡蛎(Crassostrea gigas)基因组DNA，根据长牡蛎基因组数据库 (http://www.oysterdb.com)设计长牡蛎基因启动子特异性引物。

(上游引物Cgeng2PmF，加16碱基的载体pEGFP-1同源末端1，下游引物Cgeng2PmR，加16碱基的载体pEGFP-1同源末端2)

以上述提取的长牡蛎的gDNA为模板，使用Premix Taq^TM(LA Taq^TM Version 2.0)(Takara，目录号：RR900Q)聚合酶进行PCR扩增。如表 1所示。