[发明专利]一种可卡因免疫检测试剂及其制备和检测方法

说明书

本发明公开了一种可卡因免疫检测试剂及其制备和检测方法。包括：酶标可卡因、用于检测可卡因抗体‑酶标可卡因复合物的指示试剂；上述酶标可卡因由可卡因和葡萄糖脱氢酶偶联而成。本发明的可卡因免疫检测试剂可以精确快速地确定人体血液等样品中可卡因含量。与市场上现有的检测试剂相比，本发明检测试剂具有方便快速、灵敏度高、特异性强、定量准确等优点，有利于临床的推广使用。

技术领域

本发明涉及医学检验领域，具体是一种可卡因免疫检测试剂及其制备和检测方法。

背景技术

可卡因(cocaine，COC)是古柯叶中所含的主要生物碱，又名古柯碱。可卡因是人类发现的第一种具有局麻作用的天然生物碱，为长效酯类局麻药，脂溶性高，穿透力强，对神经组织亲和性好，能产生良好的表面麻醉作用。可卡因毒性较大，小剂量时能兴奋大脑皮层，产生欣快感，随着剂量增大，使呼吸、血管运动和呕吐中枢兴奋，严重者可发生惊厥；大剂量可引起大脑皮层下行异化作用的抑制，出现中枢性呼吸抑制，并抑制心肌而引起心力衰竭。

可卡因滥用会对人体产生很大威胁，使得人类心率加快，呼吸急促，甚至出现震颤、痉挛、惊厥等现象，对人类安全、社会稳定和世界和平构成巨大威胁。因此，研究新型、灵敏、定量的可卡因检测方法对于禁毒、毒物检测、刑事鉴定等具有非常重要的实践意义和应用价值。

目前检测可卡因的常用方法有：高效液相色谱分析（HPLC）、气相色谱-质谱联用（GC-MS）、胶体金法和核磁共振光谱法等。其中，HPLC法和GC-MS法费时且不易自动化；胶体金法检测结果的灵敏度和准确性都较差，核磁共振光谱法的灵敏度也相对较低，并且体内有金属异物不能做核磁共振。

本发明采用的方法为均相酶免疫检测法，其优点为：操作简便、快速、灵敏度高、准确性好、适合于自动化，应用广泛，并且用全自动生化分析仪对小分子物质和大分子物质都能高通量快速测定。

发明内容

本发明的目的在于解决现有技术中可卡因检测过程操作复杂、以及测定准确度低的问题，本发明提供了一种快速、灵敏度高、准确检测出待测样本中可卡因含量的可卡因均相酶免疫检测试剂及其制备方法。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种可卡因免疫检测试剂及其制备和检测方法，其特征在于：酶标可卡因、用于检测可卡因抗体-酶标可卡因复合物的指示试剂；上述酶标可卡因由可卡因和葡萄糖脱氢酶偶联而成。

作为本发明进一步的方案，所述指示试剂选自酶试剂，包括：酶标偶联物和酶的底物；上述酶标偶联物包括葡萄糖脱氢酶-可卡因偶联物；上述酶的底物为葡萄糖。

作为本发明进一步的方案，所述的一种可卡因免疫检测试剂及其制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）葡萄糖脱氢酶-可卡因偶联物的制备：可卡因半抗原的制备，葡萄糖脱氢酶（GDH）与可卡因半抗原偶联，纯化偶联的酶标抗原。

（2）可卡因均相酶免疫检测试剂的制备：

试剂1的制备：由可卡因抗体和均相酶底物混合而成；

试剂2的制备：由葡萄糖脱氢酶-抗原偶联物与磷酸盐缓冲液混合而成。

作为本发明进一步的方案，所述的一种可卡因免疫检测试剂的制备方法，其特征在于，所述的步骤（1）具体过程为：

1）可卡因半抗原的制备

a. 将10-50 mg可卡因溶于2-10 mL 稀HCL中搅拌溶解，室温反应2-5小时；

b. 用稀氢氧化钠溶液调pH至中性，然后用三氯甲烷萃取，收集有机相，无水硫酸镁干燥，回收溶剂得到带羧基的可卡因半抗原。

2）葡萄糖脱氢酶（GDH）与可卡因的偶联