[发明专利]一种瘦素的化学发光检测试剂盒及其制备方法

说明书

本发明公开了一种瘦素的化学发光检测试剂盒及其制备方法。该试剂盒包括：偶联有瘦素捕获抗体的磁微粒、吖啶酯标记的瘦素检测抗体、瘦素校准品、化学发光预激发液A、化学发光激发液B以及清洗液。本发明试剂盒以磁分离化学发光技术为检测手段，同时结合吖啶酯标记技术。本发明建立的直接化学发光法灵敏度高、特异性强、准确快速，检测时间短，检测结果具有更高的准确性与重复性，该试剂盒可适用于各种发光检测仪器。

技术领域

本发明属于免疫检测分析技术领域，具体是一种瘦素的化学发光检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

瘦素是由ob基因所编码的含有167个氨基酸残基的蛋白质。分泌到血浆中的瘦素是在神经末端信号肽中除去21个氨基酸残基后，由146个氨基酸残基所组成的蛋白质，分子量约16kD，具有较强的亲水性。在血浆中绝大部分（约80％）与血浆蛋白质结合，少部分以游离形式存在，发挥生物效应。血浆中的瘦素水平与脂肪组织中ob mRNA的量、体重指数、性别和体脂百分含量呈显著正相关。

目前的研究表明，瘦素具有较广泛的生物学效应，其中较重要的是作用于下丘脑体重调节中枢引起食欲降低，减少能量的摄取，同时通过代谢率增加而

增加能量的消耗及抑制脂肪的合成，减少脂肪的堆积而使体重减轻。进一步研究表明，瘦素与下丘脑的瘦素受体结合后在中枢水平与有刺激食欲作用的增食欲素、神经Y肽（刺激食欲的作用强度稍大于增食欲素）及黑皮质素（抑制食欲）等共同作用凋节食欲及能量平衡。另一方面，瘦素受体的广泛分布，提示瘦素又可能是一种多靶器官，多功能的激素。现发现瘦素至少与下列功能和现象有关：调节糖、脂代谢，抑制胰岛素的分泌，对生殖功能的促进作用，表现为青春期及妊娠期瘦素浓度升高，甲状腺功能、骨代谢、肝脏代谢等。

到目前为止，用于检测瘦素的方法主要有：放射免疫法、酶联免疫法（ELISA）以及酶促化学发光法。放射免疫法由于碘标示踪剂存在固有半衰期，造成了试剂的有效期短，且放免法对设备的要求特殊，使它在一般实验室开展受到限制。酶联免疫吸附测定（ELISA）检测技术是利用抗原-抗体之间特异性的免疫反应识别生物液体中的靶分子，并利用酶-底物的显色反应定量的反应待测样本中靶分子的含量。该方法虽然检测价格低廉、快速，但是酶标法本身受固相反应的制约，酶标显色的稳定性也易受温度和酸碱度变化的影响，所用底物大部分为有毒物质或致癌物，且其灵敏度也不够，只适用于微量物质的检测和鉴定，已经不能满足大型医院快速定量检测的要求。CN 102901823 A（2013年1月）公开了一种酶联定量检测瘦素的试剂盒，该试剂盒将重组人瘦素多肽单克隆抗体作为包被抗体微孔板，加待测血清样品，再加相应的酶标抗体以测定待测血清样品的吸光值，其主要的主要缺点是灵敏度低，检测准确性低，成本昂贵。而酶促化学发光法是以酶标记抗原或抗体进行免疫反应，免疫反应复合物上的酶再作用于发光底物，在信号试剂作用下发光，用发光信号测定仪进行发光测定，目前常用的标记酶为辣根过氧化物酶(HRP) 和碱性磷酸酶(ALP)。CN106405117A（2016年8月）申请了一种检测瘦素抗原的板式磁性微粒子化学发光分析试剂盒，该试剂盒采用高特异性的单克隆抗体及包被抗异硫氰酸荧光素抗体的磁性微粒子固相分离技术，利用异硫氰酸荧光素和辣根过氧化物酶分别标记一株单克隆抗体和一株多克隆抗体，在液相中形成免疫夹心复合物，然后加入包被FITC抗体的磁性微粒子分离剂，进行洗涤分离，并在板式化学发光仪中进行测定。采用辣根过氧化物酶主要缺点为：鲁米诺在没有辣根过氧化物酶存在情况下，也会被H2O2氧化自身发光，本底相对较高，影响信噪比，反应动力学复杂，影响因素多，结果不够稳定，要得到灵敏度高且平台期长的底物不容易。因此，建立一种有效、快速、简单、灵敏、抗干扰性高的检测瘦素的方法具有十分重要的意义。