[发明专利]一种用于诊断评估乳腺癌的试剂盒、甲基化HOXA4/DPP6基因的检测及其应用

说明书

本发明涉及一种用于诊断评估乳腺癌的试剂盒、甲基化HOXA4/DPP6基因的检测及其应用，更具体的涉及HOXA4/DPP6基因、HOXA4/DPP6基因的甲基化检测及其在制备乳腺癌诊断、检测和筛查药物中的应用以及用于上述用途的试剂盒。本发明研究发现HOXA4/DPP6基因在乳腺癌患者肿瘤组织中甲基化程度明显高于肿瘤组织旁边的正常组织，而且甲基化水平同肿瘤进展密切相关，本发明提供了一种新的乳腺癌诊治靶点，并给出了针对其的试剂盒，其是检测乳腺癌进展以及在人群筛查和乳腺癌诊断的一种新方法，具有重要的临床应用价值。

技术领域

本发明涉及生物医药技术领域，具体涉及甲基化HOXA4/DPP6基因及其应用，更具体的涉及一种用于诊断评估乳腺癌的试剂盒、HOXA4/ DPP6基因、HOXA4/DPP6基因的甲基化检测及其在乳腺癌中的应用。

背景技术

全球肿瘤流行病统计数据(GLOBOCAN)认为乳腺癌是中国女性最常见的癌症，年龄标化率(ASR)为每10万人21.6例。据赫捷院士发表的《Cancer Statistics in China,2015》数据，在我国乳腺癌居女性肿瘤发病率第一位，2015年新增病例为27.2万，城市新发女性乳腺癌占 19.0万。根据中国国家肿瘤登记中心的数据，城市地区的ASR(34.3例 /10万女性)是农村地区的2倍(17.0例/10万女性)。社会经济发达的沿海城市发病率最高，广州乳腺癌ASR为46.6例/10万女性。在中国，诊断为乳腺癌的平均年龄为45-55岁，比西方女性更加年轻。全球乳腺癌年平均增幅达3.1％，我国各地区1988-2007年间乳腺癌发病率增长 1.2-2.8倍，随着我国人口老龄化进程的加快，女性寿命明显高于男性的普遍规律，今后我国老年女性人口的数量将持续增长；加上我国独特生育模式的影响，预计未来我国乳腺癌发病率和死亡率快速上升的趋势仍将长期持续，严重威胁我国女性健康。随着不断攀升的发病率和死亡率，乳腺癌的早防早治已成为当今医学界所面临的重大难题。

目前我国尚无一套成熟的女性乳腺癌筛查方案，《中国抗癌协会乳腺癌诊治指南与规范(2013版)》的推荐方案仍参照ACS指南。但由于我国女性乳腺癌发病年龄高峰早于美国，我国建议乳房钼靶X线摄影术 (MAM)筛查起始年龄早于美国5年，且由于亚洲女性乳腺质地、体积和经济情况的差异，无放射性的乳腺超声成为我国乳腺癌的重要筛查方法。目前临床上的快速辅助诊断手段是钼靶X光片检测，微钙化点群是重要的早期影像学征兆。然而微钙化点非常微小，混杂于大量图像背景中，导致肉眼识别困难，对医生的经验要求很高。因而近年来人们逐渐重视钼钯影像的计算机辅助诊断技术。但由于高分辨率图像巨大，个体差异较大，因而尽管近年来的图像和人工智能算法不断发展，计算缓慢、准确率较低、易发生经验主义错误等问题仍然制约着基于影像学的乳腺癌早期诊断。因此，分子诊断就成为非常必要的检测手段。目前，乳腺癌的诊断及分子分型主要依靠有创的手段获取组织标本，如穿刺活检、手术切除病灶、术中冰冻会诊样本等，存在需要借助影像学辅助等不足，检测成本相对较高、存在风险且无法做到对病情的实施跟踪和监控。因此，寻找一种快速有效的乳腺癌检测分子诊断方法具有重要的临床意义。

DNA甲基化是最早发现的基因表观修饰方式之一，真核生物中的甲基化仅发生于胞嘧啶，即在DNA甲基化转移酶(DNMTs)的作用下使二核苷酸5’-端的胞嘧啶转变为5’-甲基胞嘧啶。在现有技术中，相关的研究还十分匮乏，亟待更多的研究揭示与乳腺癌相关的甲基化基因，并阐明所述甲基化位点与乳腺癌的关系。

本发明通过长期对众多乳腺癌患者的肿瘤组织以及肿瘤组织旁边的正常组织进行高通量甲基化测序分析，筛选出几个在病例组中呈高甲基化的候选基因及其甲基化位点。并通过多例试验进行验证，获得了本申请的技术。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的是提供一种用于诊断评估乳腺癌的试剂盒、甲基化HOXA4/DPP6基因的检测及其应用，以解决现有技术中提到的不足。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现：