[发明专利]一种葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的高密度发酵方法

权利要求书

1.一种葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的高密度发酵方法，以葡萄糖氧化酶基因GOD转化的毕赤酵母基因工程菌为出发菌株，其保藏编号为CGMCCNo.11626，包括如下步骤：

用质量浓度为28％的氨水调节发酵培养基的pH值为5.0，将活化的菌种扩培液接入所述发酵培养基中，在28℃下通气搅拌18～24h进行发酵处理；

在所述发酵处理的过程中，当碳源消耗完溶氧量迅速上升时，流加补料培养基直至发酵液的OD600值为150～200；

当碳源消耗完，发酵液的溶氧量再度升高至40％以上时，开始流加诱导培养基进行诱导发酵；所述诱导培养基含有体积比为20:1的甲醇和山梨醇，每升所述甲醇中还含有12～14mL的PTM1；所述诱导发酵的条件为：发酵温度为28℃，发酵液pH值为6.5，维持整个诱导过程中甲醇的终浓度在0.3％，溶氧量始终为0；在所述诱导发酵的过程中每隔24h加维生素C，使发酵液中维生素C的终浓度为80μg/L，在诱导72h时一次性加入维生素B2，使发酵液中微生素B2的终浓度为1mM；

所述补料培养基的流加速率为18～20mL/h/L，流加时间为3.5～4.5h；

所述发酵培养基为BSM培养基，每升发酵培养基中还含有4～4.5mL PTM1；

所述补料培养基中含有质量体积浓度为50％的甘油，每升所述甘油中还含有10～14mL的PTM1；

所述补料培养基的流加速率为18～20mL/h/L，流加时间为3.5～4.5h；

所述甲醇的流加速率前10小时为2g/h/L，10小时后甲醇流加速率提高到6g/h/L；

所述活化的菌种扩培液接入发酵培养基中的接种量为9～10％。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述菌种扩培液的活化步骤包括：将保藏编号为CGMCCNo.11626的菌种接种到YPD培养基中，在28～30℃下震荡培养12～16h，震荡速率为200～250rpm，得到一级种子扩培液；

将所述一级种子扩培液转接到BMGY培养基中，在28～30℃下震荡培养，震荡速率为200～250rpm，当培养液的OD600为6～10时，得到活化的菌种扩培液。

3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述保藏编号为CGMCCNo.11626的菌种接种到YPD培养基上的接种量为3％～10％。

4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述一级种子扩培液转接到BMGY培养基中接种量为3％～10％。