[发明专利]一种黑果枸杞离体快速繁殖方法

说明书

本发明公开了一种黑果枸杞离体快速繁殖方法，包括以下步骤：选取无菌植株作为外植体供体，将叶片尖部1/2~1/3剪下，近轴面朝下平接在不添加任何植物生长调节剂的MS培养基上；添加蔗糖和琼脂，灭菌，之前用碱溶液调pH值；接种完用散射光培养，待外植体长出根系再置于光周期的光照下培养生芽；芽体可以迅速生长为植株；优点在于：不添加植物生长调节剂，成本低廉、操作简单、一次成苗、所得植株无玻璃化且生长健壮；取叶片为外植体，不影响供体植物的生长；不经过愈伤组织阶段直接成苗，所得植株的体细胞无性系变异频率较低、能在更大程度上保持供体植株的性状；植株移栽之后生长良好，成活率高达100%。

技术领域

本发明属于林木生物技术领域，具体涉及一种黑果枸杞离体快速繁殖方法。

背景技术

黑果枸杞（Lycium ruthenicum Murr.）为茄科枸杞属多年生多棘刺灌木，是一种盐生药用植物，重要的生态经济型树种。在我国，黑果枸杞主要分布在宁夏、山西、甘肃、青海、新疆、西藏等省区。黑果枸杞中含有多种人体必需的氨基酸和微量元素，可提高人体免疫能力；黑果枸杞被称为原花青素之王，其原花青素具有清除自由基、增强免疫力、延长果蝇寿命、降低小鼠血清总胆固醇和甘油三脂、升高血清、肝组织和机体总抗氧化能力等功效；从果汁中提取的黑果枸杞色素稳定性好、着色力强，是国内急需的理想食用天然花色甙，不但可应用于药品和食品中，还可作为天然染料应用于轻纺工业。同时，黑果枸杞具有抗旱、抗寒、耐盐碱、根蘖性强和耐土壤贫瘠等诸多优点，是盐碱地治理、护坡、防止水土流失的良好树种。因此，黑果枸杞无论在经济产品开发，还是在生态环境治理方面都具有广泛的市场前景和开发潜力，可以成为医药保健、经济林建设和盐碱地生物防治的重要生态经济型树种。黑果枸杞集经济价值、生态价值、药用价值及保健价值于一身，其价格一直居高不下。近年来，农牧民疯狂采摘让一些野生黑果枸杞植株不再挂果。如何保护并充分合理的开发利用黑果枸杞资源，是非常值得关注的重要课题。目前，黑果枸杞的研究绝大多数集中在对其生理生态、有效成分分析、开发利用以及治理荒漠化和野生种源驯化等方面。有关黑果枸杞的组培无性繁殖，近几年也有报道。但是均在培养基中添加了不同种类和浓度的植物生长调节剂，例如6-BA和NAA等。目前未见在不使用任何植物生长调节剂的条件下建立黑果枸杞离体快速繁殖体系的报道。

发明内容

为了解决黑果枸杞野生资源稀缺、种苗价格高的问题，本发明提供一种高效、快速、低成本的黑果枸杞离体繁殖方法。

一种黑果枸杞离体快速繁殖方法，包括以下步骤：

1）选取组培瓶内驯化良好的无菌小植株，要求植株健康幼嫩、尚未木质化、生长旺盛、叶片浓绿，无菌实生种苗、组培苗均可；无菌种苗要求在组培瓶内生长1个月以上；培养室光周期为12h，光照强度5500~6500 lx，温度24~26℃，相对湿度25~35%；

2）用手术剪在超净工作台内将种苗叶片尖部或中部1/3~1/2剪下，近轴面朝下平接在不添加任何植物生长调节剂的MS培养基上；培养基添加35~40g/L的蔗糖和4.0-5.0 g/L的琼脂，121℃高压灭菌15~20 min，之前用碱溶液将pH值调为5.4~5.8；将接种完的材料置于培养室的散射光或完全黑暗条件下培养7~15 d散射光强度为8~12lx；待有效外植体均长出根系之后，再将材料置于12h光周期的弱光或者强光条件下培养，弱光为1000~2000lx，强光为5500~6500lx；此条件下根系基部又会产生芽体；芽体可以迅速生长为植株；以上培养均在培养室内进行，温度24~26℃，湿度25~30%，光源均由LED灯管提供。

3）叶切片接种1~2月，产生的植株便可移栽；

步骤1）中所述的光照强度为6000 lx，温度为25℃，相对湿度30%；

步骤2）中所述的散射光强度为10lx；所述弱光强度为1000lx；所述强光强度为5500lx