[发明专利]一种观察生物大分子分布的方法及应用

权利要求书

1.一种观察生物大分子分布的方法，其特征在于：步骤如下：

1)材料的选择

选择组织切片或具有良好渗透性的完整或部分植物组织；

2)封闭

封闭液封闭样品恒温水平摇动1h，移除封闭液，PE缓冲液清洗；

3)一抗免疫标记

a.根据所需检测的多糖种类选择相应的一抗，将选择的一抗配置成一抗工作液，对样品进行结合；

b.移除一抗工作液，PE缓冲液清洗；

4)二抗免疫标记

①JIM/LM+CBM作为一抗时

a.向样品中加入小鼠抗His的抗体工作液，恒温水平摇动0.5h；

b.移除小鼠抗His的抗体工作液，PE缓冲液清洗三次，每次10分钟；

c.将配制的Alexa Fluor-488标记的驴抗大鼠抗体以及Alexa Fluor-647标记的驴抗小鼠抗体的混合二抗工作液，对样品进行结合，恒温水平摇动0.5h；

d.移除二抗工作液，PE缓冲液清洗三次，每次10分钟；

②CCRC+CBM作为一抗时

a.Alexa Fluor-488标记的驴抗小鼠抗体工作液对样品进行结合，恒温水平摇动0.5h；

b.移除工作液，PE缓冲液清洗三次，每次10分钟；

c.小鼠抗His的抗体工作液对样品进行结合，恒温水平摇动0.5h；

d.移除工作液，PE缓冲液清洗三次，每次10分钟；

e.Alexa Fluor-647标记的驴抗小鼠抗体工作液对样品进行结合，恒温水平摇动0.5h；

f.移除工作液，PE缓冲液清洗三次，每次10分钟；

5)显色

上述处理完的样品均加Calcofluor White工作液对样品染色15分钟；

6)图像获取

将显色后的样品滴加PE缓冲液于共聚焦显微镜下观察；

所述生物大分子为植物多糖；

所述的恒温水平摇动为37℃，50rpm；

所述一抗的结合为37℃，50rpm恒温水平摇动0.8h。

2.根据权利要求1所述观察生物大分子分布的方法，其特征在于：所述一抗工作液和二抗工作液是由各抗体按1∶1的体积比混合而成。

3.一种观察生物大分子分布的试剂盒，其特征在于：包括封闭液、PE缓冲液、一抗、二抗、小鼠抗His的抗体和显色液；

所述的一抗为JIM系列抗体、LM系列抗体、CCRC系列抗体中的一种和CBM系列抗体中的一种的组合；

所述二抗为Alexa Fluor系列荧光标记抗体；

所述显色液为Calcofluor White工作液。