[发明专利]一种柠檬酸对小鼠胰岛素抵抗形成的影响的实验方法

说明书

本发明公开了一种柠檬酸对小鼠胰岛素抵抗形成的影响的实验方法，该方法包括以下步骤：步骤1、动物分组及给药；步骤2、口服糖耐量实验；步骤3、动物的处死；步骤4、生化试验及生理切片；步骤5、RT‑PCR；步骤6、统计学分析。本发明对纯品柠檬酸做了研究，在同时灌胃柠檬酸和高脂乳剂的情况下，通过检测血脂、胰岛素敏感指数、相关基因的表达以及靶器官组织细胞形态变化，探讨柠檬酸是否能缓减或抑制小鼠产生胰岛素抵抗，为后续野山杏总有机酸的研究提供一定依据。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种柠檬酸对小鼠胰岛素抵抗形成的影响的实验方法,具体地说，涉及一种柠檬酸对高脂乳诱导小鼠胰岛素抵抗形成的影响的实验方法。

背景技术

胰岛素抵抗(Insulin resistance，IR)是指外周组织及其靶器官对胰岛素(Insulin，INS)的敏感性及反应性降低，即正常剂量的INS产生低于正常生物学效应的一种状态。胰岛素抵抗不仅是一种代谢疾病，而且是高血压、高血脂、动脉粥样硬化、冠心病等代谢疾病之间的纽带，更是Ⅱ型糖尿病的发病基础和伴随性状。近几年胰岛素抵抗患者人数成指数倍增加，如何防治胰岛素抵抗具有重要的意义。

天然柠檬酸在自然界中分布很广，天然的柠檬酸存在于植物的果实和动物的骨骼、肌肉、血液中。人工合成的柠檬酸是用砂糖、糖蜜、淀粉、葡萄等含糖物质发酵而制得的，可分为无水和水合物两种。纯品柠檬酸为无色透明结晶或白色粉末，无臭，有一种诱人的酸味。2006年-2016年，有关研究定量定性分析后认为，新疆哈密市伊吾县的野山杏除含有多种维生素和人体所需的微量元素外，含量最多的是有机酸和黄酮两种成分，且柠檬酸占总有机酸含量的50％以上。

目前，现有技术中，还没有柠檬酸对小鼠胰岛素抵抗形成的影响的实验方法的相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种柠檬酸对小鼠胰岛素抵抗形成的影响的实验方法，该方法对纯品柠檬酸做了研究，在同时灌胃柠檬酸和高脂乳剂(HFE)的情况下，通过检测血脂、胰岛素敏感指数、胰岛素抵抗指数以及相关基因的表达，探讨柠檬酸是否能缓减或抑制高血脂诱导的小鼠产生胰岛素抵抗，为后续野山杏总有机酸的研究提供一定依据。

其具体技术方案为：

一种柠檬酸对小鼠胰岛素抵抗形成的影响的实验方法，包括以下步骤：

步骤1、动物分组及给药

昆明种小鼠，60只，雌雄对半，体重(20±2)g，由新疆医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(新)2016-0003。适应性饲养1周后，小鼠随机分为6组，每组10只，即正常对照组，高脂血症模型组，阳性对照组(给予血脂康)及柠檬酸(CA)高、中、低剂量组。正常对照组每日灌服相应体积的质量分数为0.5％CMC-Na溶液，其他组于每日上午均灌服剂量为20mL·Kg^-1·d^-1高脂乳剂；下午正常组和模型组自由饮水进食，阳性对照组灌服血脂康200mg·Kg^-1·d^-1，CA高、中、低剂量组分别给予100、50、10mg·Kg^-1·d^-1，连续给药4周，给药期间，自由进水，进食。

步骤2、口服糖耐量实验

于实验第28天，禁食12h，尾部采血测空腹血糖。给予Control组灌胃0.5％CMC-Na、HFE组灌胃高脂乳剂、血脂康组灌胃200mg g·kg^－1的血脂康及CA+HFE组灌胃高脂乳剂和不同剂量的柠檬酸，20min后各组小鼠灌胃2500mg·kg^－1的葡萄糖，测定0、15、30、60、120min的血糖值，并计算各组120min内的血糖曲线下面积。

步骤3、动物的处死

于实验第30天，禁食12h，眼眶采血，制备血清，用于测定血清生化指标，快速解剖，取肝脏、骨骼肌，用于基因测序。