[发明专利]微生物对肠道菌群的影响的评估方法及具有稳定的肠道菌群的动物模型的构建方法

权利要求书

1.一种微生物对肠道菌群的影响的评估方法，其特征在于，包括如下步骤：

给无菌动物饲喂粪便悬液，使得所述无菌动物的肠道内达到稳态，得到动物模型；

分别饲喂第一组动物模型和第二组动物模型，其中，给所述第一组动物模型饲喂无菌饲料，给所述第二组动物模型饲喂含有待测微生物的无菌饲料，所述含有待测微生物的无菌饲料中的所述待测微生物的添加量为10⁵cfu/g～10⁷cfu/g，收集饲喂后所述第一组动物模型的粪便得到第一粪便，收集饲喂后所述第二组动物模型的粪便得到第二粪便；及

通过实时荧光定量PCR分别检测所述第一粪便和所述第二粪便中肠道菌群的含量，所述肠道菌群包括双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌和肠球菌，

若则所述待测微生物对所述肠道菌群具有促进作用，其中，a'表示所述第一粪便中所述双歧杆菌的含量，b'表示所述第一粪便中所述乳杆菌的含量，c'表示所述第一粪便中所述肠杆菌的含量，d'表示所述第一粪便中所述肠球菌的含量，a表示所述第二粪便中所述双歧杆菌的含量，b表示所述第二粪便中所述乳杆菌的含量，c表示所述第二粪便中所述肠杆菌的含量，d表示所述第二粪便中所述肠球菌的含量。

2.根据权利要求1所述的评估方法，其特征在于，所述给无菌动物饲喂粪便悬液，使得所述无菌动物的肠道内达到稳态的操作具体如下：

在无菌环境中，给所述无菌动物饲喂所述粪便悬液，饲喂14天～21天，得到所述动物模型，其中，所述粪便悬液的浓度为0.2g/mL～0.5g/mL，所述粪便悬液的饲喂量为每kg所述无菌动物每次饲喂0.3mL～0.5mL的所述粪便悬液。

3.根据权利要求2所述的评估方法，其特征在于，所述无菌环境的温度为20℃～24℃，湿度为40％～70％。

4.根据权利要求1所述的评估方法，其特征在于，所述粪便为猪的粪便或人的粪便，所述无菌动物为无菌小鼠或无菌大鼠。

5.根据权利要求1所述的评估方法，其特征在于，所述给所述第二组动物模型喂含有待测微生物的无菌饲料的操作中，每kg所述第二组动物模型每次饲喂2g～5g的含有所述待测微生物的无菌饲料，饲喂的频率为1次/天～2次/天，饲喂的时间至少为7天。

6.根据权利要求1所述的评估方法，其特征在于，所述无菌饲料包括小麦、奶粉、豆粕、植物油、维生素、酵母、食盐、磷酸氢钙及柠檬酸，所述小麦、所述奶粉、所述豆粕、所述植物油、所述维生素、所述酵母、所述食盐、所述磷酸氢钙及所述柠檬酸的质量比为51：19.5：11：9.75：0.001：3.5：0.875：0.5：0.001～52：20.5：12：10.75：1：4.5：1.875：1.5：0.525。

7.根据权利要求1所述的评估方法，其特征在于，所述通过实时荧光定量PCR分别检测所述第一粪便和所述第二粪便中肠道菌群的含量的操作具体如下：

分别提取所述第一粪便和所述第二粪便中肠道菌群的基因组DNA，将所述基因组DNA分别与其中一种所述肠道菌群的正向引物、反向引物混合进行实时荧光定量PCR扩增反应，所述肠道菌群包括双歧杆菌、乳杆菌、肠杆菌和肠球菌；及

分别获取所述第一粪便和所述第二粪便中每一种所述肠道菌群实时荧光定量PCR扩增反应的CT值，将所述CT值带入相应的细菌标准品建立的标准曲线中，得到所述第一粪便和所述第二粪便中的每一种所述肠道菌群的含量。