[发明专利]樟树叶烟用香料的制备方法在审
申请号: | 201711409601.8 | 申请日: | 2017-12-23 |
公开(公告)号: | CN107955710A | 公开(公告)日: | 2018-04-24 |
发明(设计)人: | 彭天辉 | 申请(专利权)人: | 寻乌县绿之源生物科技有限公司 |
主分类号: | C11B9/02 | 分类号: | C11B9/02;C12N1/20;C12N1/16;C12N1/02;A24B3/12;C12R1/07 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 樟树 叶烟用 香料 制备 方法 | ||
1.一种樟树叶烟用香料的制备方法,其特征在于:所述方法包括以下步骤:
(1)原料准备:
①选取樟树叶作为原料、灭菌得到无菌樟树叶备用;
②烟叶复合培养基的制备:将烟叶和水按1:5的比例混合后加热至100℃,并保持1~2小时,过滤得到烟水,将烟水和微生物固体培养基按3:7~10的比例混合,制成烟叶复合培养基;
(2)产香微生物的筛选:
①取烟叶5~10g,加入到无菌蒸馏水中,从中取100~1000μl的液体,滴加到由步骤(1)得到的烟叶复合培养基上,以平板划线分离或稀释涂平板法,在有氧或厌氧条件下培养,长出菌落后,将烟叶复合培养基放到体视镜下筛查,挑取10~50个酵母菌和/或芽孢杆菌的单菌落;
②将挑出的单菌落在烟叶复合培养基中分别进行小量扩增培养,将小量扩增培养得到的菌液与无菌樟树叶混合,进行小试量的固体堆积发酵,然后对发酵好的樟树叶采用水蒸气蒸馏法进行提取,获得发酵型樟树叶提取物;
③将发酵型樟树叶提取物稀释后添加至香烟中,并通过卷烟加香评吸筛选所需的产香微生物,然后保存筛得的产香微生物的菌种;
(3)利用步骤(2)中得到的产香微生物与无菌樟树叶混合,进行固体堆积发酵;
①将保存的产香微生物菌种活化:将所述产香微生物的菌种接种到固体PDA培养基上,置于20~37℃的恒温培养箱中培养24~48h使其中的菌种活化,再将活化的菌种接种于PDA液体培养基中,于20~37℃恒温培养24~48h得到的培养液,将所述培养液离心弃除上清液,所得到的沉淀用生理盐水稀释震荡均匀,即得到的活化菌种液;
②利用活化菌种液进行固体堆积发酵;
(4)对步骤(3)得到的发酵好的樟树叶采用水蒸气蒸馏法进行提取,得到樟树叶烟用香料;
其中,所述步骤(2)和步骤(4)中的水蒸气蒸馏法为:将上述发酵好的樟树叶,置于水蒸气蒸馏装置中,按发酵固体与纯净水质量比1:10~15的比例加入的纯净水,加热至100℃,直至发酵固体与水的混合物开始沸腾,连续加热2~10h,收集发酵型樟树叶挥发油,利用95%的乙醇溶液按与挥发油质量比例100~1000:1稀释挥发油,得到樟树叶烟用香料;
所述步骤(2)和步骤(3)中的固体堆积发酵为:将产香微生物按照1:1~10的质量比接种到无菌樟树叶中,放置于28~35℃的培养箱中发酵2~7天,得到发酵好的樟树叶。
2.根据权利要求1所述的樟树叶烟用香料的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述的烟叶为自然陈化一年至两年的烟叶。
3.根据权利要求1所述的樟树叶烟用香料的制备方法,其特征在于:步骤(1)中所述的烟叶为白肋烟叶。
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