[发明专利]一种干细胞冻存与复苏方法

权利要求书

1.一种干细胞冻存与复苏方法，其特征在于：包括如下步骤：

S1、细胞冻存液配制：以质量百分含量计，30～40％人血白蛋白，二甲基亚砜5～15％，羟乙基淀粉占3～6％，余量为无血清培养基，配好的冷存液放在1～8℃的温度条件下低温冷藏；

S2、容器消毒：用消毒液对存放干细胞的容器表面进行消毒，并通过紫外线进行全面照射，照射时长5～10分钟；

S3、干细胞检测：对干细胞进行病毒检测，保证干细胞安全可靠；

S4、干细胞处理：将干细胞分成分装在经S2消毒后的不同容器内，并将盛有干细胞的容器放置在1～10℃的无菌环境内存放30～50分钟；

S5、干细胞筛选处理：将S4处理后的干细胞进行离心处理，去除上清液，然后通过显微镜观察干细胞活跃性，挑选出活跃性最强的一组；

S6、冻存：将S5挑选出的干细胞在0～10℃的低温环境下，将干细胞和冻存液加入新的容器中，然后将冻存容器放入程序降温装置，先在2～8℃的温度条件下低温冷藏1～2小时，再在-10～-40℃的温度条件下冷冻12～24小时，再在-40～-80℃的温度条件下冷冻12～24小时，然后将冻存容器放置在液氮中冷冻；

S7、干细胞复苏：将S6中干细胞从液氮中取出，将取出的冻存容器放置在5～15℃无菌环境下解冻3～5小时，然后再浸入在温度为37℃的无菌温水环境中进行解冻2～4小时，并进行匀速摇摆晃动使其融化复苏。

2.根据权利要求1所述的一种干细胞冻存与复苏方法，其特征在于：所述S2中消毒液为纯度为70～75％的酒精。

3.根据权利要求1所述的一种干细胞冻存与复苏方法，其特征在于：所述S2中紫外线照射环境相对湿度为50～60％、温度为15～20℃，紫外线强度不得低于70uW/cm2。