[发明专利]一种脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法

权利要求书

1.一种脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法，其特征在于，包括如下步骤：

对试验仔猪进行脂多糖诱导处理，得到待测仔猪；

从待测仔猪的前腔静脉采血并分离血清，测定血清中的生化指标，判断脂多糖诱导对仔猪肝脏功能的影响；

取待测仔猪的肝脏样品，观察肝脏组织的形态结构和肝细胞的超微结构，并测定肝脏细胞程序性坏死关键基因及其蛋白表达，分析脂多糖诱导对仔猪肝脏细胞程序性坏死的作用。

2.如权利要求1所述的脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法，其特征在于，对试验仔猪进行脂多糖诱导处理，得到待测仔猪的步骤中：所述脂多糖为大肠杆菌血清型脂多糖，纯度大于99％，诱导处理的方式为腹膜注射。

3.如权利要求2所述的脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法，其特征在于，所述大肠杆菌血清型脂多糖的注射量为仔猪每公斤体重注射80～150μg，诱导时长为2～24h。

4.如权利要求1所述的脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法，其特征在于，对试验仔猪进行脂多糖诱导处理，得到待测仔猪的步骤之前，还包括：

将试验仔猪饲养在饲养笼中，试验仔猪于22～25℃温度条件下自由采食饮水10天；

其中，在对仔猪进行诱导处理前10～13h停止供料。

5.如权利要求4所述的脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法，其特征在于，所述试验仔猪为34～36日龄的断奶仔猪，体重为8.7～9.1kg。

6.如权利要求1所述的脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法，其特征在于，从待测仔猪的前腔静脉采血并分离血清，测定血清中的生化指标，判断脂多糖诱导对仔猪肝脏功能的影响的步骤，具体包括：

用促凝真空管从待测仔猪的前腔静脉采血，然后通过离心分离得到血清，利用生化分析仪测定血清中的生化指标，判断脂多糖诱导对仔猪肝脏功能的影响；

其中，生化指标包括血清中谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶以及谷氨酰转肽酶的活性。

7.如权利要求1所述的脂多糖诱导仔猪肝脏细胞程序性坏死模型的建立方法，其特征在于，取待测仔猪的肝脏样品，观察肝脏组织的形态结构和肝细胞的超微结构，并测定肝脏细胞程序性坏死关键基因及其蛋白表达，分析脂多糖诱导对仔猪肝脏细胞程序性坏死的作用的步骤，具体包括：

对采血后的待测仔猪进行戊巴比妥钠肌肉注射，使待测仔猪完全麻醉后屠宰并取出肝脏；

将肝脏放置于冰上，并用生理盐水冲掉肝脏上的血迹，然后切取肝脏样品，用于肝脏组织的形态结构和肝细胞的超微结构观察，取部分剩余肝脏剪碎后，用于肝脏细胞程序性坏死关键基因及其蛋白表达的测定，根据观测结果分析脂多糖诱导对仔猪肝脏细胞程序性坏死的作用；

其中，所述肝脏细胞程序性坏死关键基因包括受体相互作用蛋白1、受体相互作用蛋白3、混合系列蛋白激酶结构域样蛋白以及磷酸甘油酸变位酶5。