[发明专利]弓形虫慢性感染雄性小鼠生殖系统靶标基因的鉴定及其在临床上的应用

说明书

本发明提供了一种应用RNA‑seq技术研究弓形虫慢性感染小鼠附睾组织差异表达基因的方法，包含以下步骤：(1)小鼠附睾组织的RNA提取；(2)对步骤(1)所得的RNA进行文库构建和测序；(3)对步骤(2)测序结果进行生物信息学分析，获取弓形虫慢性感染小鼠附睾组织的差异表达基因，筛选并鉴定与生殖相关的基因。本发明提供的弓形虫慢性感染附睾组织差异表达基因的方法能快速有效地进行基因表达差异的研究，用qPCR方法检测筛选的靶标基因来鉴定附睾是否感染弓形虫，对于提高公畜的生殖潜力及动物繁殖率均有重要理论价值和应用前景，将它们作为衡量公畜生殖系统感染弓形虫的分子标记，有利于快速定位到具有研究价值或商业应用价值的检测靶标、防治药物靶点。

技术领域

本发明涉及寄生虫学领域，涉及一种弓形虫感染雄性小鼠附睾组织损伤机制的研究；具体涉及一种应用RNA-seq技术获取弓形虫慢性感染小鼠附睾组织差异表达基因的方法，揭示弓形虫对雄性生殖系统附睾的表达调控机制，获得应对特定疾病信号主要的基因，还涉及一种弓形虫感染的检测方法。

背景技术

弓形虫是细胞内寄生原虫，几乎可以感染所有的温血动物。孕妇感染弓形虫后，虫体垂直传播给胎儿可造成胎儿畸胎、流产和死亡等现象。弓形虫的感染还可造成男性生殖系统的损伤、性功能和生育力降低等严重后果，直接影响着人类健康和优生优育。其中，附睾是雄性生殖系统中重要的附属性器官，是精子成熟和储存的场所。在睾丸中生成的精子不具备授精能力，且缺乏运动性，精子在附睾中成熟是一个高度程序化的过程，可能受到精子自身因素和附睾微环境的影响。由于附睾的功能专一，是激素作用的终末器官且本身又不合成激素，所以我们的研究有助于发现弓形虫感染在附睾的精子成熟过程中的影响因素。前人研究表明弓形虫感染引起雄性生殖管道受损，性腺功能减退等疾患；Bohring研究发现不育症患者精液中有大量弓形虫速殖子，抗精子抗体(AsAb)呈现阳性；杨连第等也在弓形虫感染的附睾组织切片中证实了精子数量明显减少，输精管上皮细胞有颗粒样变性，曲细精管管腔狭窄。同时其他研究还发现附睾间质中有炎性细胞。弓形虫感染的小鼠附睾内精子密度、精子活动率均显著低于对照组小鼠，但精子畸形率升高(如无头、弯尾、双头等)。

随着后基因组时代的到来，转录组学、蛋白质组学、代谢组学等各种组学技术相继蓬勃发展起来，其中转录组学是当前发展最成熟的技术。转录组学是研究活细胞在某一功能状态下所含mRNA的类型和拷贝数，反应了某一特定时间和空间细胞内所有基因的表达情况。遗传中心法则表明，遗传信息通过mRNA从DNA传递到蛋白质。因此，mRNA作为DNA和蛋白质信息传递的“桥梁”，对它的研究就显得尤为重要。

目前，弓形虫感染对雄性不育的研究大都集中在流行病学方面，通过血清学方法检测出弓形虫抗体、用PCR方法检测到精液中有弓形虫DNA，以及做病理组织切片观察到弓形虫感染引起组织和细胞水平的损伤，但是还未有报道关于应用转录组测序技术研究弓形虫慢性感染小鼠雄性生殖系统中的附睾组织差异表达基因的方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种应用RNA-seq技术研究弓形虫慢性感染小鼠附睾组织差异表达基因的方法、弓形虫PRU株慢性感染致雄性小鼠附睾组织损伤机制的转录组分析方法及其应用。

本发明第一方面提供一种应用RNA-seq技术研究弓形虫慢性感染小鼠附睾组织差异表达基因的方法，其特征在于，包含以下步骤：

(1)小鼠附睾组织的RNA提取；

(2)对步骤(1)所得的RNA进行文库构建和测序；

(3)对步骤(2)测序结果进行生物信息学分析，获取弓形虫慢性感染小鼠附睾组织的差异表达基因。

在本发明一实施例中，步骤(1)中，小鼠包括昆明鼠、Balb/c鼠、沙鼠中的一种或多种。