[发明专利]L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法

说明书

本发明提供了一种L‑脯氨酰胺的液相色谱分析方法，包括以下步骤：分别精密量取L‑脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，得到L‑脯氨酰胺衍生物溶液；将所述L‑脯氨酰胺衍生物溶液进行色谱分析。本发明的液相色谱分析方法能够准确灵敏地检测L‑脯氨酰胺和D‑脯氨酰胺。

技术领域

本发明涉及医药领域，具体涉及一种L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法。

背景技术

L-脯氨酰胺是合成维格列汀(Vildagliptin)的重要手性中间体，其对映异构体D-脯氨酰胺通常存在于市售的L-脯氨酰胺产品中，两者的结构式分别如下：

L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的紫外吸收均较弱，常规的带紫外检测器的高效液相色谱仪(HPLC)无法灵敏地检测L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的含量，存在样品不易被检测的问题。因此，有必要研究能够准确灵敏地检测L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺的含量的分析方法，以便能够在后续的维格列汀合成工艺中有效控制手性异构体的含量。

发明内容

为克服上述问题，本发明提供了一种灵敏、高效的L-脯氨酰胺的液相色谱分析方法，所述方法包括以下步骤：

1)分别精密量取L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入二乙胺乙醇溶液，涡旋混匀，反应一定时间，再加入三氟乙酸乙醇溶液，涡旋混匀，即得L-脯氨酰胺衍生物溶液；

2)将L-脯氨酰胺衍生物溶液进行色谱分析。

在一个实施方案中，所述L-脯氨酰胺溶液、三乙胺乙醇溶液、衍生试剂溶液、二乙胺乙醇溶液、三氟乙酸乙醇溶液通过如下步骤来制备：

将L-脯氨酰胺溶解于稀释液中以制备L-脯氨酰胺溶液；

将衍生试剂溶解于乙腈中以制备衍生试剂溶液；

将三乙胺溶解于乙醇中以制备三乙胺乙醇溶液；

将二乙胺溶解于乙醇中以制备二乙胺乙醇溶液；

将三氟乙酸溶解于乙醇中以制备三氟乙酸乙醇溶液。

在一个实施方案中，进行上述色谱分析的色谱仪器及条件为：

检测仪器：高效液相色谱仪，配备紫外检测器；

色谱条件：

色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IC 4.6×250mm,5um；流动相：正己烷-乙醇(40/60(v/v))；检测波长：262nm；流速：1.0ml/min；柱温：30℃；进样体积：10μL；样品盘温控：15℃；运行时间：30min；稀释液：0.1％的三氟醋酸/乙醇混合液。

在一个实施方案中，所述衍生试剂选自芴甲氧羰酰氯(FMOC-Cl)，其结构式如下：

进一步地，所述衍生试剂FMOC-Cl与L-脯氨酰胺和D-脯氨酰胺反应制备其对应的衍生物的原理如下：

另一方面，本发明还提供了衍生试剂用于L-脯氨酰胺的液相色谱分析的用途。

在一个实施方案中，所述衍生试剂选自芴甲氧羰酰氯。

另一方面，本发明还提供了L-脯氨酰胺衍生物，其具有如下结构：

又一方面，本发明还提供了化合物的制备方法，包括以下步骤：