[发明专利]一种基于一步法荧光定量巢式RT-PCR检测寨卡病毒的引物组及试剂盒

说明书

本发明属于生物技术领域，涉及一种基于一步法荧光定量巢式RT‑PCR检测寨卡病毒的引物组及试剂盒；所述引物组包括一对外部引物和一对内部引物，所述外部引物的上下游序列如SEQ ID NO：1～2所示，所述内部引物的上下游序列如SEQ ID NO：3～4所示；本发明设计的ZIKV一步法荧光定量巢式RT‑PCR引物引物特异性好、灵敏度高其重复性好，设计的一步法荧光定量巢式RT‑PCR检测方法可灵敏、准确、稳定和快速的检测寨卡病毒的存在，可以检测到的最低浓度是6.4✕10^‑1 TCID₅₀/mL的病毒。为快速灵敏地检测ZIKV提供了技术手段，对目前寨卡病毒的临床快速诊断和公共防控都具有重要意义。

技术领域

本发明属于生物技术领域，更具体地，涉及一种基于一步法荧光定量巢式 RT-PCR检测寨卡病毒的引物组及试剂盒。

背景技术

寨卡病毒(zika virus，ZIKV)于1947年通过黄热病监测网络在乌干达寨卡丛林的恒河猴样本中被首次鉴定，其名称也来源于此，并于1952年在乌干达和坦桑尼亚被报道可感染人类。ZIKV在分类上属于黄病毒科(Flaviviridae)黄病毒属(Flavivirus)，为单股正链RNA病毒，其基因组全长约10.8kb。ZIKV粒子呈球形，直径约40～70nm。ZIKV基因组编码一个单一的开放阅读框(open reading frame)，编码一个多聚蛋白，在翻译后被切割成不同的功能蛋白，包括 3个结构蛋白(C、prM/M、E))和7个非结构蛋白(NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5)。遗传进化分析显示，ZIKV主要分成非洲型和亚洲型两个谱系，近几年在人际间流行传播的都是亚洲型。

ZIKV主要通过伊蚊(包括埃及伊蚊和白纹伊蚊)进行传播，最新研究显示 ZIKV也可以通过母婴传播、血液传播和性传播，进一步增加了ZIKV传播和流行的风险。大部分情况下ZIKV感染不会表现出临床症状，只有约20％的ZIKV 感染者会表现出较轻症状，包括斑丘疹、结膜炎、轻度发热、头痛和关节痛等症状，临床症状与登革病毒感染引起的症状难以区分。引人关注的是，ZIKV感染能够引起胎儿小头症(Microcephaly)，严重危害生育健康。大量研究表明，ZIKV 感染是成人格林-巴利综合征(Guillain-Barré syndrome，GBS)的一个诱发因子。另外ZIKV可在人类感染者的精液中被检测到，而在小鼠模型中可导致雄性不育和严重的睾丸损伤。

建立快速、准确和方便的检测方法是监测和防控ZIKV的必要工具和前提。发明人前期的专利(CN 105861753)公开了一种检测寨卡病毒的巢式RT-PCR 方法、引物及试剂盒，需要分两次进行巢式RT-PCR，不仅步骤繁琐，而且容易造成样品污染，且检测灵敏度有待提高。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有寨卡病毒的巢式RT-PCR存在的缺陷和不足。建立了寨卡病毒的一步法荧光定量巢式RT-PCR检测方法，为快速灵敏地检测ZIKV提供了技术手段，对目前寨卡病毒的临床快速诊断和公共防控都具有重要意义。

本发明的第一个目的是提供一种基于一步法荧光定量巢式RT-PCR检测寨卡病毒的引物组。

本发明的第二个目的是提供一种检测寨卡病毒的试剂盒。

本发明的上述目的是通过以下技术方案给予实现的：

一种基于一步法荧光定量巢式RT-PCR检测寨卡病毒的引物组，包括一对外部引物ZIKV/1st和一对内部引物ZIKV/2nd，所述外部引物的上下游序列如SEQ ID NO：1～2所示，所述内部引物的上下游序列如SEQ ID NO：3～4所示。

ZIKV/1st/F：5’-acttgaytgtgaaccraggacaggccttgacttttcag at-3’(SEQ ID NO：1)