[发明专利]一种靶向CD38的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向CD38的单链抗体，所述靶向CD38的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD38的单链抗体为人源化单链抗体。本发明还提供了包括所述靶向CD38的单链抗体的嵌合抗原受体T细胞，所述靶向CD38的嵌合抗原受体可以专一性地靶向表达CD38的肿瘤细胞，促进T细胞的扩增，高效且特异性的杀伤肿瘤细胞。此外，人源化单链抗体制得的靶向CD38的嵌合抗原受体T细胞具有更好的维持细胞的活力和杀伤力。本发明还提供了该靶向CD38的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向CD38的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

恶性肿瘤(癌症)已成为威胁人类生命的元凶，发病率成上升趋势。CD38是一种单链Ⅱ型跨膜糖蛋白，主要表达于骨髓瘤、淋巴瘤等，在恶性浆细胞中表达量较高。CAR-T(嵌合抗原受体T细胞)技术是一种新型细胞疗法，它是将经过CAR改造的T细胞回输至人体，激活自身免疫系统，对肿瘤细胞进行杀伤，被认为是目前最有效的恶性肿瘤的治疗方式之一。目前还未有靶向CD38的嵌合抗原受体T细胞的制备和研究。此外，CAR-T细胞的在体维持能力(per sistence)是CAR-T长期疗效的保证，但实际上CAR-T在回输后几天到几周就完全消失，而未能发挥长效持久的杀伤肿瘤细胞的能力。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种靶向CD38的单链抗体，以及包括所述靶向CD38的单链抗体的嵌合抗原受体T细胞。所述靶向CD38的嵌合抗原受体可以专一性地靶向CD38，促进T细胞在患者体内扩增，高效且特异性地杀伤肿瘤细胞，同时带人源化单链抗体的靶向CD38的嵌合抗原受体T细胞能够持久地维持其自我更新活力和杀伤力。本发明还提供了一种靶向CD38的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

第一方面，本发明提供了一种靶向CD38的单链抗体，所述靶向CD38的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，所述靶向CD38的单链抗体为人源化单链抗体。

可选的，所述靶向CD38的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

可选的，所述靶向CD38的单链抗体编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQ ID NO:2具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQ ID NO:1。

本发明第一方面提供的所述靶向CD38的单链抗体能够与CD38蛋白发生特异性结合，对表达CD38的肿瘤细胞有很好靶向性。此外，所述靶向CD38的单链抗体为人源化单链抗体，可以避免引起人机体的免疫反应。

第二方面，本发明提供了一种靶向CD38的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向CD38的嵌合抗原受体CAR-CD38，所述CAR-CD38包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向CD38的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中所述靶向CD38的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

其中，所述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向CD38的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述胞内信号区的氨基酸序列的氨基端相连。

本发明中，所述胞外铰链区用于促进所述靶向CD38的单链抗体与肿瘤上的CD38结合。可选的，所述胞外铰链区包括CD8α铰链区、CD28铰链区、CD4铰链区、CD5铰链区、CD134铰链区、CD137铰链区、ICOS铰链区中的一种或多种的组合。

进一步可选的，所述胞外铰链区为CD8α铰链区。