[发明专利]改进的酮还原酶突变体及其制备方法和应用有效
| 申请号： | 201711421965.8 | 申请日： | 2017-12-25 |
| 公开（公告）号： | CN108048416B | 公开（公告）日： | 2021-05-18 |
| 发明（设计）人： | 卢江平;刘芳;于文燕 | 申请（专利权）人： | 吉林凯莱英医药化学有限公司 |
| 主分类号： | C12N9/04 | 分类号： | C12N9/04;C12N15/53;C12P17/12;C12P7/22 |
| 代理公司： | 北京品源专利代理有限公司 11332 | 代理人： | 巩克栋 |
| 地址： | 133700 吉林省延边朝*** | 国省代码： | 吉林;22 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 改进 还原酶 突变体 及其 制备 方法 应用 | ||
1.一种改进的酮还原酶突变体，其特征在于，其为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的12至214位氨基酸经修饰、取代、缺失或添加一个或几个氨基酸获得的氨基酸序列；
其中，所述突变体的突变位点为(I)、(II)所示的任意一个：
(I)所述突变体的突变位点为F12Y、V13I、Q15S、I77G、P87C、P87R、F122V、Y124L、Y124F、L128F、D147N、T163W、T170K、I193V或F214T中的任意一个；
(II)所述突变体的突变位点为Y124F和L128F的组合，Y124F和T163W的组合，P87R和T163W的组合，L128F和I193V的组合、Y124F、T163W和F214T的组合，Y124F、L128F和F214T的组合或Y124F、L128F、T163W和I193V的组合中的任意一种；
其中，所述突变体具有酮还原酶的活性。
2.根据权利要求1所述的突变体，其特征在于，所述突变体的氨基酸序列如SEQIDNO.3-9所示。
3.一种制备如权利要求1-2中任一项所述的突变体的方法，其特征在于，包括：
(1)制备重组宿主细胞，其中所述细胞包含DNA分子，所述DNA分子为编码根据权利要求1-2中任一项所述突变体的核酸序列；
(2)在适合表达所述突变体的培养基中孵育所述宿主细胞；
(3)从所述培养基中回收步骤(2)中由所述宿主细胞表达的所述突变体的多肽。
4.编码如权利要求1-2中任一项所述的酮还原酶突变体的核苷酸序列。
5.一种表达载体，其特征在于，所述表达载体含有至少一个拷贝的如权利要求4所述的核苷酸序列。
6.根据权利要求5所述的表达载体，其特征在于，所述表达载体上还包括葡萄糖脱氢酶的基因。
7.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞含有权利要求5或6所述的表达载体。
8.一种如权利要求1-2中任一项所述的突变体和/或如权利要求7所述的宿主细胞在制备手性醇中的应用。
9.一种如权利要求1-2中任一项所述的突变体和/或如权利要求7所述的宿主细胞在制备手性药物中的应用。
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