[发明专利]一种靶向DR5的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种靶向DR5的单链抗体，所述靶向DR5的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。本发明还提供了一种包括所述靶向DR5的单链抗体的嵌合抗原受体T细胞，所述靶向DR5的嵌合抗原受体可以专一性地靶向DR5，促进T细胞在患者体内的扩增，可以高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，更好的维持细胞的活力和杀伤力，并且对正常细胞不会造成损伤。本发明还提供了一种靶向DR5的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

技术领域

本发明涉及医学生物领域，特别涉及一种靶向DR5的单链抗体、嵌合抗原受体T细胞及其制备方法和应用。

背景技术

癌症已成为威胁人类生命的元凶，发病率成上升趋势，人们从寻找诱导引起肿瘤细胞凋亡或者克服肿瘤细胞对凋亡耐受的角度入手，发现了肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)，是能够诱导细胞凋亡的肿瘤坏死因子超家族成员。死亡受体5(death receptor5；DR5)属肿瘤坏死因子受体超家族成员(TN FRSF10B)，其胞质区含死亡结构域，主要分布于肿瘤细胞。TRAIL与细胞表面DR5结合，可诱导细胞凋亡。DR5在肝癌等多种实体瘤细胞中广泛表达，而在普通细胞中表达很微弱的细胞表面抗原。

免疫细胞治疗是现有科技中唯一有可能彻底清除癌细胞的方法，其治疗肿瘤具有特异性强、几乎无毒副作用的巨大优势弥补了传统疗法的弊端，在国内外已经用于临床治疗恶性肿瘤，嵌合抗原受体T细胞技术(CAR-T)为当前过继性细胞回输治疗技术最新的免疫细胞技术之一，因其能够在体内能激活自身免疫系统，持续性地靶向肿瘤细胞进行杀伤，最终达到清除恶性肿瘤细胞的目的而受到广泛的关注和研究。目前还未有靶向DR5的嵌合抗原受体T细胞的制备和研究。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种靶向DR5的单链抗体，以及包括所述靶向DR5的单链抗体的靶向DR5的嵌合抗原受体T细胞。所述靶向DR5的嵌合抗原受体可以专一性的靶向DR5，促进T细胞在患者体内的扩增，可以高效且特异性的杀伤肿瘤细胞，更好的维持嵌合抗原受体T细胞的活力和杀伤力，并且对正常细胞不会造成损伤。本发明还提供了一种靶向DR5的嵌合抗原受体T细胞的制备方法和应用。

第一方面，本发明提供了一种靶向DR5的单链抗体，所述靶向DR5的单链抗体包括如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。

可选的，所述靶向DR5的单链抗体的编码基因包括如SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列。

可选的，所述靶向DR5的单链抗体编码基因应该考虑简并碱基，即如SEQ ID NO:1所示的氨基酸序列的编码基因包括如SEQ ID NO:2所示的核苷酸序列，保护范围还应该保护与SEQ ID NO:2具有碱基简并性质的核苷酸序列，这些核苷酸序列对应的氨基酸序列仍然为SEQ ID NO:1。

本发明第一方面提供的所述靶向DR5的单链抗体能够与DR5蛋白发生特异性结合，对肿瘤细胞特别是表达DR5的实体瘤细胞具有较强的亲和活性。

第二方面，本发明提供了一种靶向DR5的嵌合抗原受体T细胞，包括靶向DR5的嵌合抗原受体CAR-DR5，所述CAR-DR5包括从氨基端到羧基端顺次连接的靶向DR5的单链抗体、胞外铰链区、跨膜区和胞内信号区的氨基酸序列，其中所述靶向DR5的单链抗体包括如SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列。

其中，所述“从氨基端到羧基端顺次连接”具体为：所述靶向DR5的单链抗体的氨基酸序列的羧基端与所述胞外铰链区的氨基酸序列的氨基端相连，所述胞外铰链区的氨基酸序列的羧基端与所述跨膜区的氨基酸序列的氨基端相连，所述跨膜区的氨基酸序列的羧基端与所述胞内信号区的氨基酸序列的氨基端相连。

本发明中，所述胞外铰链区用于促进所述靶向DR5的单链抗体与肿瘤上的DR5结合。可选的，所述胞外铰链区包括CD8α铰链区、CD28铰链区、CD4铰链区、CD5铰链区、CD134铰链区、CD137铰链区、ICOS铰链区中的一种或多种的组合。