[发明专利]一种提高贞芪多糖免疫活性的修饰方法

说明书

技术领域

本发明涉及中药多糖结构改造技术领域，具体涉及一种提高贞芪多糖免疫活性的硫酸化修饰方法。

背景技术

多糖广泛存在于动物、植物和微生物组织中，是由单糖聚合而成的天然高分子化合物，是生物体内除蛋白质和核酸外又一类重要的生物大分子，具有抗病毒、抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等生物活性。多糖的生物活性与其结构有着密切的关系，特别是当引入某些化学基团时，使糖链的柔韧性和空间结构发生变化，从而引起多糖的生物学活性改变或使多糖产生新的活性。因此，对多糖结构进行适当的化学修饰是多糖领域研究的热点。

多糖的化学修饰主要有硫酸化、磷酸化的、硒化等方法。由于硫酸化修饰能显著提高多糖的免疫活性而倍受关注。常用硫酸化修饰方法有浓硫酸法、氯磺酸-吡啶法、氯磺酸-甲酰胺法、三氧化硫-吡啶法等。其中氯磺酸-吡啶法以其试剂易制备、反应条件相对简单、产物回收方便等优点而最为常用。影响氯磺酸-吡啶法修饰的主要因素有氯磺酸-吡啶配比、反应温度、反应时间。

贞芪多糖是以传统中药黄芪和女贞子为原料制成，具有补气养阴的功能，用于久病虚损，气阴不足，配合手术、放射治疗、化学治疗，促进正常功能的恢复。国内已有很多专利表明其具有很好的免疫活性，根据现代药理学实验表明，其药理作用有：1、提高机体免疫功能；2、升高血细胞，保护骨髓、肾上腺皮质和肝脏功能；3、促进干扰素产生。大都是通过多糖类活性物质发挥作用的。通过发明人进行的检索，虽然我国贞芪多糖制剂已有胶囊剂、颗粒剂、片剂等多种剂型，大多采用常规的提取方法，通过水煮、醇提或一些简单的精制处理，在已有中国专利申请中，专利申请号为“200310118934.7”，名为“贞芪多糖药物制备方法改进”的申请、专利申请号为“200510038192.6”名称为“注射用贞芪多糖冻干粉针制剂及其制备方法”的申请以及专利申请号为“200510012502.7”，名称为“贞芪多糖注射用制剂及其制备方法”的申请，其产品虽然有一定的临床效果，只是对女贞子、黄芪中的提取物进行精制，到目前为止，尚未见到选用通过化学修饰的方法提高贞芪多糖免疫活性的文献报道。

发明内容

有鉴于此，本发明针对贞芪多糖生物活性低的问题，提供一种提高贞芪多糖增强免疫活性的硫酸化修饰方法，达到显著提高贞芪多糖的免疫活性的目的。

本发明提供了一种提高贞芪多糖免疫活性的修饰方法，步骤包括：提取、纯化贞芪多糖，将贞芪多糖混悬于DMF后，加入到酯化试剂中，60～95℃下振荡反应1～3h，反应结束后加入冰水终止反应，冷却，后处理得到硫酸化贞芪多糖；所述酯化试剂制备步骤包括：将氯磺酸滴加至吡啶中，搅拌反应得酯化试剂，所述氯磺酸与吡啶的质量比为1:4～1:8。

本发明的有益效果是：

1.建立了贞芪多糖的硫酸化修饰方法，以产物的免疫活性为指标，通过正交实验优化了贞芪多糖的硫酸化修饰条件。

2.证明硫酸化修饰能够显著提高贞芪多糖的免疫活性，并筛选出一种免疫活性最好的硫酸化贞芪多糖，为研制免疫增强剂提供材料。

与现有技术相比，本发明还具备如下优点：

1.贞芪多糖的硫酸化修饰国内外未见报道，本发明提供了一种提高贞芪多糖免疫活性的硫酸化修饰方法及其优化的修饰条件，填补了国内外研究的空白。

2.通过本发明的实施，证明天然贞芪多糖的免疫作用微弱，通过硫酸化修饰能够显著提高其免疫活性，并筛选出一种活性最好的硫酸化贞芪多糖，可以作为新型增强免疫药物的材料。

附图说明

图1为多糖单独刺激时各组外周血淋巴细胞的增殖率，a-c标注不同字母者差异显著(P<0.05)；

图2为多糖协同PHA刺激时各组外周血淋巴细胞的增殖率，a-b标注不同字母者差异显著(P<0.05)；

图3为多糖单独刺激时各组脾淋巴细胞的增殖率，a-c标注不同字母者差异显著(P<0.05)；

图4为多糖协同LPS刺激时脾淋巴细胞的增殖率，a-d标注不同字母者差异显著(P<0.05)；

具体实施方式

本发明提供了一种提高贞芪多糖免疫活性的修饰方法，步骤包括：提取、纯化贞芪多糖，将贞芪多糖混悬于DMF后，加入到酯化试剂中，60～95℃下振荡反应1～3h，反应结束后加入冰水终止反应，冷却，后处理得到硫酸化贞芪多糖；所述酯化试剂制备步骤包括：将氯磺酸滴加至吡啶中，搅拌反应得酯化试剂，所述氯磺酸与吡啶的质量比为1:4～1:8。