[发明专利]橡胶树白粉菌内源启动子WY7及其用途

说明书

本发明公开了一种橡胶树白粉菌内源启动子WY7及其用途，所述启动子WY7具有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列，或其具有启动子功能的变体。本发明还涉及含有所述启动子的核酸构建体、载体、重组细胞、转基因植物、外植体和愈伤组织。所述启动子能够用于调控双子叶植物和单子叶植物中的外源目的基因的表达，为转基因植物的基因表达提供了一种全新的工具和选择。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及橡胶树白粉菌内源启动子WY7及其用途。

背景技术

启动子是基因表达的一种重要的顺式作用元件，位于结构基因5'端上游，能活化RNA聚合酶并使之与模板DNA准确结合，具有转录起始的特异性。启动子能提供RNA聚合酶特异识别的结合位点，能够控制基因的转录起始和基因的表达，通常位于基因转录起始位点近端的核苷酸序列内，主要由核心启动区、上游元件和应答元件组成。

根据真核基因编码的产物和RNA聚合酶的种类，可以把启动子分为三类，I型启动子即rRNA基因启动子、II型启动子即mRNA基因启动子型和III型启动子即tRNA基因启动子。高等植物的启动子属于mRNA基因启动子，其核心结构大多包含一个TATA盒以及起始子。

根据基因的转录模式，可以把启动子大致分为三类，诱导型启动子、组织特异性启动子和组成型启动子。诱导型启动子是一类在植物特定的生长、发育阶段，在某些特定的物理或化学信号的刺激下，可以大幅度地提高目的基因的表达水平，也可以解除胁迫、使基因表达停止的启动子。组织特异性启动子也称之为器官特异性启动子，在这些启动子调控下,基因可以定向、专一地只在某些特定的器官或组织部位表达,并往往表现出发育调节的特性。这种类型的启动子所启动的外源基因在植物中的表达具有特异性,能够克服组成型启动子启动的外源基因在受体植物中非特异性的持续、高效表达所造成的浪费,而在需要该基因大量表达的特定组织部位则因表达量过低又达不到预期效果以及由此引发的一系列代谢紊乱问题。组成型启动子是一类表达比较持续稳定的启动子，能够控制结构基因并使其转录水平大致恒定，在不同组织、器官表达水平没有明显差异，不表现时空特异性。从植物本身克隆组成型启动子是研究的热点，目前使用最广泛的两个组成型启动子是烟草花叶病毒(CaMV)35S启动子以及来自根癌农杆菌Ti质粒T-DNA区域的胭脂碱合成酶基因启动子(Nos)和章鱼碱合成酶基因启动子(Ocs)。另外,水稻Atcl启动子序列结构也研究得比较清楚。这些也是转基因植物研究中应用最广的启动子。

随着组成型启动子35S的应用越来越广泛，有许多问题也随之暴露出来。在目前的研究中发现，植物组成型启动子的增强子核心序列与动物的增强子相同，但在动物系统中，增强子的组织表达是特异性的，而35S驱动的基因在植物各组织中的表达是非特异性的，在应用中逐渐暴露出一些问题。例如外源基因在植物不同组织中表达，产生代谢产物积聚在植物体内打破其原有的代谢平衡，影响其正常生长发育。除此之外，在35S启动子处还含有一个核苷酸的重复的六聚体花纹结构，这一序列的突变可能会减弱启动子的启动表达能力，至今都没有行之有效的措施来避免这一现象的发生。

专性寄生是指寄生物离开宿主就不能生存的现象。专性寄生菌由于无法进行离体培养，给各种研究尤其是分子生物学方面的研究带来了巨大的困难，以致于专性寄生菌大多都尚未建立遗传转化体系，各种分子机理研究严重滞后。橡胶树白粉菌是一种重要的专性寄生真菌，间接影响着橡胶产业的发展。其遗传转化体系尚未建立。我们利用生物信息学方法预测其内源启动子并进行验证，试图找到一些橡胶树白粉菌的内源强启动子，以便了解其调控外源目的基因和内源基因的分子机理，对橡胶树白粉菌侵染的分子机制、其遗传转化体系的构建，以及转基因植物表达外源基因的研究提供一些新的思路。

发明内容

针对以上现有技术的不足之处，本发明提供一种橡胶树白粉菌内源启动子WY7。

本发明采取的技术方案如下：

一种橡胶树白粉菌内源启动子WY7，所述启动子含有选自以下任意一组并具有启动子功能的核苷酸序列：