[发明专利]羊水细胞培养基、羊水细胞培养方法及培养基的应用

说明书

本发明涉及一种羊水细胞培养基，包括基础培养基，还包括以下组分：转铁蛋白、亚硒酸钠、胰岛素、三碘甲状腺氨酸、胰高血糖素、孕酮、氢化可的松、睾酮、雌二醇、碱性成纤维细胞生长因子、维生素E、维生素C、抗生素和胎牛血清。本发明还涉及上述羊水细胞培养基在产前诊断羊水细胞生长中的应用以及一种羊水细胞的培养方法。本发明的羊水细胞培养基具有促进羊水细胞的增殖，羊水细胞培养基的质量优异的优点。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术，特别涉及一种羊水细胞培养基、羊水细胞培养方法及培养基的应用。

背景技术

中国是世界上的人口大国，也是出生缺陷和残疾高发国家。出生缺陷不仅是一个严重的公共卫生问题，而且已成为影响经济发展和人们正常生活的社会问题。出生缺陷和残疾不仅日益成为影响人口素质的重要问题，也给家庭和社会造成沉重的经济负担。出生前/产前诊断染色体核型分析是有效降低出生缺陷的最佳方法，目前国内各大医院已经开展羊水和绒毛的染色体核型分析技术。而羊水培养基的质量是决定培养成果的关键。目前临床应用的羊水细胞培养基几乎均为国外进口，中国目前尚缺乏质量上与其相当的培养基生产技术和能力。这不仅让人感到遗憾，也使相关医疗费用始终保持在较高的水平，成本较高，在一定程度上限制了产前诊断在出生缺陷防治中的应用。因而开发自主知识产权的绒毛、羊水培养基对于降低产前诊断成本，提高产前诊断率以及优生优育水平具有积极意义。

由于羊水中活细胞少，培养周期长，无菌要求高，稍不注意即致使培养失败。即使培养成功，因分裂相少，形态不佳，达不到分析要求，也无法进行进一步研究。因此，成功的羊水细胞培养，除需严格的实验操作技术和经验外，培养基的质量也是非常关键的。为了缩短羊水细胞培养周期，提高成功率，已有了一些改良型的培养基的研究报道。目前国内的多家产前诊断机构都使用进口德国AMNIOPAN羊水培养基和美国Gibico羊水培养基，国内的湖南湘雅医基因技术有限公司、重庆和广州也有几家公司进行该项技术研究，但是技术还不够成熟，产品没有广泛应用到临床。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种培养质量好的羊水细胞培养基、羊水细胞培养方法及培养基的应用。

为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案为：

本发明提供了一种羊水细胞培养基，包括基础培养基，还包括以下组分：转铁蛋白、亚硒酸钠、胰岛素、三碘甲状腺氨酸、胰高血糖素、孕酮、氢化可的松、睾酮、雌二醇、碱性成纤维细胞生长因子、维生素E、维生素C、抗生素和胎牛血清。

本发明还提供了上述的羊水细胞培养基在产前诊断羊水细胞生长中的应用。

另外，本发明还提供了一种羊水细胞的培养方法，将0.5-lmL的18-22周龄的原代羊水细胞样本接种于5±1mL的上述的羊水细胞培养基上，进行细胞培养，收获获得所述羊水细胞。

本发明的有益效果在于：

通过改变羊水细胞培养基中有效成分，配置出上述组分的羊水培养基，可以提高羊水细胞培养的成功率，加快培养速度，提高用于染色体制的细胞分裂相的比例，使本发明的羊水细胞培养基在技术、质量上达到优异水平，其在技术、质量上可达到甚至超过进口的培养基(例如进口德国AMNIOPAN羊水细胞培养基和美国Gibico羊水细胞培养基)。

附图说明

图1为试验例1培养获得的羊水细胞在4х10光学显微镜下细胞结晶紫染色图片；

图2为对比例1培养获得的羊水细胞在4х10光学显微镜下细胞结晶紫染色图片；

图3为对比例2培养获得的羊水细胞在4х10光学显微镜下细胞结晶紫染色图片；

图4为对比例3培养获得的羊水细胞在4х10光学显微镜下细胞结晶紫染色图片；

图5为试验例1和对比例1-3的P-ERK1/2的表达量；