[发明专利]一种异鼠李素的制备方法及其抑制小鼠黑色素瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡的应用

说明书

本发明公开一种异鼠李素的制备方法，包括从沙棘果渣中提取黄酮类化合物；异鼠李素的纯化、鉴定；并公开了将异鼠李素应用于抑制小鼠黑色素瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡的过程，包括异鼠李素工作液的配制；瘤细胞的培养与药物作用；细胞MTT检测；细胞周期分析；细胞凋亡分析。通过采用本发明所述的异鼠李素的制备方法制备的异鼠李素，纯度可达95.0％，纯度高，并且制备操作简单，易于工业化；应用于小鼠黑色素瘤细胞增殖的抑制并诱导其细胞凋亡，抗性效果好、细胞毒性小，开发了一种基于异鼠李素的抗肿瘤药物，具备良好的开发前景。

技术领域

本发明属于医药领域，具体涉及一种异鼠李素的制备方法及其抑制小鼠黑色素瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡的应用。

背景技术

黑色素瘤是源于表皮正常黑素细胞或原有痣细胞的一种恶性肿瘤，恶性程度高，居皮肤恶性肿瘤第三位(占6.8％～20％)，是皮肤癌致死的主要肿瘤(75％)，全世界每年大约有160000例恶性黑色素瘤患者被诊断出，且其发病率还在以每年3％～8％的比例逐步升高。酪氨酸酶(EC 1.14.18.1，Tyrosinase)是黑色素形成的关键酶，在黑色素合成途径中起关键作用，且与黑色素瘤的发生直接相关。

异鼠李素为黄酮类物质，CAS号为480-19-3，分子式C16H12O7，分子量316.26，分子结构式：

异鼠李素(3，5，7-三羟基-2-(4-羟基-3-甲氧基苯基)苯并吡喃-4-酮) 是一种来源于胡颓子科植物沙棘(Hippophae fhamnoides L.)果实的黄酮类物质，具有提高微血管血流量、抗氧化、抗炎、、抗肿瘤、抗过敏及调节免疫功能等多种生物学和药学功能。

现有研究表明，异鼠李素对多种肿瘤细胞均具有抗肿瘤活性，还对酪氨酸酶的活性调控和黑色素合成具有明显的抑制作用，具有抑制效果好、细胞毒性小等优点。因此亟需开发一种基于异鼠李素的抗黑色素瘤药物，提供一种抗性效果好、细胞毒性小的抗肿瘤药物

发明内容

针对上述技术问题，本发明提供一种异鼠李素的制备方法及其抑制小鼠黑色素瘤细胞增殖并诱导细胞凋亡的应用，制备过程简单、易于工业化、产品纯度高，开发了一种基于异鼠李素的抗黑色素瘤药物，提供了一种抗性效果好、细胞毒性小的的抗肿瘤药物。

本发明的技术方案如下：

一种异鼠李素的制备方法，包括以下步骤：

步骤a、从沙棘果渣中提取黄酮类化合物；

所述步骤a包括：

脱脂，取干燥的沙棘果渣，以1∶8的料液比加入石油醚，浸泡 1h后，用旋转蒸发仪于水浴70℃加热回流1.5h，过滤，保留滤渣，将滤渣再以1∶6的料液比加入石油醚后加热回流1h，过滤，回收滤渣，使石油醚充分挥发至干，待提取用；

提取：称取脱脂后的沙棘果渣，采用超声波提取法提取，提取液过滤，浓缩后，得到总黄酮浓缩液；

单因素分析及正交优化实验；

步骤b、异鼠李素的纯化、鉴定；

所述步骤b包括：根据所述步骤a的提取步骤得到黄酮粗品，再将黄酮粗品浓缩液装入分液漏斗中，加入等体积的正丁醇充分萃取；去掉正丁醇相，保留水相，再用乙酸乙酯反复萃取，合并乙酸乙酯相；将乙酸乙酯相用聚酰胺柱分离，依次用10％乙醇，30％乙醇，50％乙醇，75％乙醇和90％乙醇洗脱收集，将柱分离后的各组分溶液用高效液相色谱仪检测，得到纯化并鉴定后的异鼠李素。