[发明专利]一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法

说明书

本发明建立了一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法。所述方法包括如下步骤：S1.测定齐墩果酸的紫外吸收系数；S2.使用紫外可见分光光度计测定待测样品的吸光度，利用吸光度和齐墩果酸的紫外吸收系数来计算样品中灵芝三萜的含量，所述灵芝三萜含量的计算公式为X=100%×A×V×f/(E×L×m×1000)，其中，X为质量百分比含量，A为吸光度，V为定容体积，f为稀释倍数，E为齐墩果酸的吸光系数，m为称样量，L为光程长度。该方法使用紫外吸收系数测定灵芝制品中总三萜，无需标准物质，不仅节省大量标准物质购买经费而且避免了标准物质对检测结果偏差的影响，方法检出限低，精密度好，回收率高，稳定可靠，具有很好的重现性。

技术领域

本发明涉及灵芝三萜含量领域，更具体地，涉及一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法。

背景技术

灵芝为多孔菌科真菌灵芝的子实体。具有补气安神、止咳平喘的功效。灵芝三萜是灵芝中发现的一类三萜类物质，目前已分离出超过350种化学物质。灵芝三萜是灵芝制品中的主要化学和药效成分之一。灵芝中所含三萜类化合物具有特别显著的生理活性：三萜类化合物中的不少化学成分在抗肿瘤、保肝、降血糖、降血脂、增强单核吞噬细胞系与NK细胞功能、增强体液免疫功能、抗放射、镇痛、镇静、抗衰老等方面显示出了较强的活性。目前，灵芝三萜的检测没有现行有效的国家、行业、地方标准可依据。

目前，灵芝制品中灵芝三萜的检测方法主要为紫外分光光度法检测以齐墩果酸或熊果酸为标准物质，用紫外分光光度法绘制标准曲线外标法测定灵芝三萜的含量。但该方法有一个较大的缺点：由于齐墩果酸和熊果酸都属于抗氧化剂，极易分解，导致了标准物质的含量极易发生变化，实验的重现性较差，标准物质放置时间越久，所得到样品中灵芝三萜含量越高，同一样品含量测定可能会出现百分之几百的偏差。因此，一个准确可靠的灵芝三萜含量检测方法具有重要意义。发明内容

本发明旨在克服上述现有灵芝三萜检测方法重现性差的问题，建立一种重现性良好准确可靠的灵芝三萜的检测方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是：

一种紫外吸收系数法测定灵芝三萜含量的方法，包括如下步骤：

S1.测定齐墩果酸的紫外吸收系数；

S2.使用紫外可见分光光度计测定待测样品的吸光度，利用吸光度和齐墩果酸的紫外吸收系数来计算样品中灵芝三萜的含量，

所述灵芝三萜含量的计算公式为X=100%×A×V×f/(E×L×m×1000)，其中，X为质量百分比含量，A为吸光度，V为定容体积，f为稀释倍数，E为齐墩果酸的吸光系数，m为称样量，L为光程长度。

本方法先测定齐墩果酸的紫外吸收系数，通过紫外吸收系数法来测定灵芝三萜的含量，不受标准物质含量的影响，测定结果不会因为标准物质的改变而偏差巨大，结果更加准确，重现性好。且本方法不需要使用昂贵的标准物质，成本低。

优选地，所述齐墩果酸的紫外吸收系数的测定方法为：称取齐墩果酸标准物质，用无水乙醇稀释到0.1g/L，测定其吸光度，计算紫外吸收系数。采用无水乙醇作为溶剂不仅经济性好，而且对齐墩果酸标准物质的溶解性好，有利于准确测定紫外吸收系数。

优选地，所述齐墩果酸的紫外吸收系数通过平行测定大于等于20次后取平均值。在灵芝三萜含量的计算公式中，齐墩果酸的紫外吸收系数是关键的计算参数，齐墩果酸系数的测定关系到整个检测方法的准确性。多次平行测定可以降低误差，保证齐墩果酸吸收系数的准确性，进而提高检测数据的真实性和可靠性。

优选地，所述过滤采用直径≤0.45 μm的微孔滤膜过滤。