[发明专利]一种用于治疗AML的嵌合抗原受体T细胞、制备方法及应用

说明书

本发明提供一种用于治疗AML的嵌合抗原受体T细胞、制备方法及应用，本发明用于治疗AML的嵌合抗原受体T细胞，其表面表达嵌合抗原受体CAR‑1和嵌合抗原受体CAR‑2；所述嵌合抗原受体CAR‑1是在pcDNA3.1(+)载体氨基端到羧基端顺次拼接IL‑12、CD33scFv。所述嵌合抗原受体CAR‑2是将CD 28‑CD3ζ基因片段连接于pIRESpuro3(Clontech)载体构成。本发明在CAR载体的制备过程中，设计共表达白细胞介素‑12(interleukin‑12，IL‑12)的CD 33 CAR载体。将CAR‑1和CAR‑2载体共转染T细胞，即可获得稳定过表达CAR‑1和CAR‑2的T细胞株，即IL‑12‑CD33‑CAR T细胞。本发明T细胞可用于制备急性髓系白血病(AML)治疗的药物。

技术领域

本发明涉及分子细胞生物学领域，特别涉及一种用于治疗AML的嵌合抗原受体T细胞、制备方法及应用。

背景技术

急性髓细胞白血病(acute myelocytic leukemia，AML)是一种常见的、预后较差、死亡率最高的血液恶性肿瘤，占全部急性白血病的70％左右，发病率大约为4～6/10万人。目前60岁及60岁以下AML患者的治愈率为35％～40％，而60岁以上老年AML患者治愈率仅5％～15％[1]。另一个不容乐观的现状是，AML患者在病情缓解后复发的概率高达43％，且这部分人的五年生存率仅为7％～12％[2,3]。国际上治疗AML的方法有：分子靶向治疗、诱导分化治疗、联合化疗、造血干细胞移植等多种治疗方法，对于某些特定种类的AML，仍有治愈的希望。我国临床治疗AML的方案多为联合化疗以及骨髓移植，但由于后者的捐献源稀缺和限制，使得很多病患错过了最佳治疗时机，多维持在联合化疗控制病情阶段。目前，临床上用于治疗AML的药物主要为两大类：抗生素类药(阿糖胞苷、米妥蒽醌)和植物类药(高三尖山酯碱、依托泊苷)。以上药物副作用较大，主要有恶心、呕吐，是所有抗白血病药物中胃肠道反应最突出的代表。其次造成骨髓抑制也较明显，使白细胞、血小板明显减少，可出现中枢神经系统毒性，严重者由于中枢神经系统的不可逆损害而致死。对于一些复发性/难治愈性AML患者来说，复发后的挽救化疗方案常常为大剂量或非常规的化疗药物，副作用巨大，无法接受强化疗的老年AML患者的生存期仅有5～10个月[4]。

在过去的40年中，尽管人们对AML的认识更加深入，但是与其它血液肿瘤相比，AML的治疗并没有明显的变化，迫切需要新的治疗手段来提高AML患者的生存质量、延长AML患者的生存期。传统化疗对于急性白血病效果不佳主要是因其无法有效针对白血病干细胞(leukemic stem cells，LSCs)。究其原因主要是由于LSCs基本上都是处于静止期，并可以随时增殖分化成为白血病细胞，同时他们还具有较强的自我修复能力。随着分子生物学的研究进展，急性白血病的治疗已从过去单一依靠化疗、放疗等杀灭白血病细胞的治疗方法，向诱导分化、外周血干细胞移植、脐血干细胞移植等生物治疗联合应用的方向转变。新兴的治疗手段在对白血病的治疗上，更大程度地选择性杀伤肿瘤细胞，减少对正常造血干细胞的抑制作用，降低对全身其他脏器的不良反应上更具有显著的效果。对于LSCs表面特异性抗原的研究以及特异性细胞免疫治疗技术也都是目前的研究热点。