[发明专利]一种检测急性早幼粒细胞白血病的基因探针组合物及试剂盒和应用

说明书

本发明公开了一种检测急性早幼粒细胞白血病的基因探针组合物及试剂盒和应用，该基因探针组合物包括PML基因探针和RaRα基因探针，所述PML基因探针包括RP11‑8P11、RP11‑243B22、RP11‑161C1；所述RaRα基因探针包括RP11‑58E20、RP11‑48O10、RP11‑465J4。所述PML基因探针和RaRα基因探针均为经过荧光素标记的探针。本试剂盒可用于对急性早幼粒细胞白血病进行分子病理分型。可直接用于中期或间期急性早幼粒细胞白血病细胞的荧光杂交法检测，而无需细胞培养和制备高质量的中期染色体片，操作大大简化。

技术领域

本发明涉及生物遗传领域，尤其是一种检测急性早幼粒细胞白血病的基因探针组合 物及试剂盒和应用。

背景技术

急性早幼粒细胞白血病(APL)是一种血液系统恶性肿瘤，是急性髓细胞白血病(AML) 的一种特殊类型，被FAB协作组定为急性髓细胞白血病M3型。其特点是骨髓及其他造血 组织中有大量白血病细胞无限制地增生，并进入外周血液，而正常血细胞的制造被明显抑制，该病居年轻人恶性疾病中的首位，病因至今仍不完全清楚。而急性早幼粒细胞白 血病约95％以上存在有PML/RARα融合基因。分子生物学研究表明该融合基因是APL特 异的分子标志物，具有高度的特异性，是APL患者发病的重要机制。

目前各类型肿瘤的诊断都有着从细胞学诊断的水平向分子诊断水平发展的趋势，荧 光原位杂交(FISH)是2O世纪8O年代初期在原有的放射性原位杂交技术的基础上发展起来的一种非放射性原位杂交技术，Bauman将RNA标记上荧光后作为探针进行DNA检测。 其基本原理是用已知的标记单链核酸为探针，按照碱基互补的原则，与待检材料中未知 的单链核酸进行异性结合，形成可被检测的杂交双链核酸。荧光原位杂交具有安全、快 速、灵敏度高、检测信号强、杂交特异性高、能同时显示多种颜色等优点，但目前应用 于急性早幼粒细胞白血病(APL)分子诊断的FISH诊断试剂盒在国内市场上仍为空白。

随着细胞遗传学与肿瘤病因学研究的不断深入，各种研究显示染色体不稳定性即数 值异常(非整倍体)和结构重排(缺失、基因扩增和易位)与肿瘤的形成和发展密切相关。包括比较基因组杂交等的急性早幼粒细胞白血病基因组异常相关研究发现包括PML和 RARα等一系列重要基因在急性早幼粒细胞白血病的发生发展中起重要作用。15号染色 体长臂2区2带和17号染色体长臂2区1带易位t(15；17)(q22；q21)是急性早幼粒 白血病(AcutePromyelocytic Leukemia,APL)所具有的特征型染色体畸变。该染色体 改变导致位于15q22的早幼粒白血病(PML)基因与位于17q21的维甲酸受体a(RARa) 基因发生融合。PML/RARa融合基因在90％以上APL初发患者均可检出，已成为APL的特 异分子标志。病毒可能是主要的致病因子，但还有许多因素如放射、化学毒物(苯等) 或药物、遗传素质等可能是致病的辅因子。相关研究已发现融合蛋白PML/RARα在APL 发病过程中具有极为重要的作用，它能阻滞正常造血分化，引起细胞分化停滞在早幼粒 细胞阶段，导致早幼粒细胞白血病的发生。

APL发病凶险、死亡率高，但近年由于诱导分化剂-全反式维甲酸(ATRA)的应用，骨髓移植的开展以及三氧化二砷联合用药，使得APL成为AML中治疗效果和预后最好的 一型。靶向药物ATRA可以特异性地抑制PML/RARa融合蛋白的活力，从而有效地治疗APL 白血病。检测PML/RARa融合基因，一方面可以为APL提供初始诊断，进而为ATRA靶向 治疗提供用药依据。另一方面，还可用于APL微小残余白血病的监测。由于APL即使经 ATRA诱导达完全缓解后，PML/RARa仍有较高的阳性率,因此，PML/RARa融合基因阳性率 还可用作预后评估的依据。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是，提供一种检测急性早幼粒细胞白血病的基因探针组 合物及试剂盒和应用，可以用于确定急性早幼粒细胞白血病的分子病理类型，判断病情预后，指导个体化治疗，评估临床治疗效果，监测病灶复发和转移。