[发明专利]一种安普霉素的磁免疫化学发光检测试剂盒及其应用

权利要求书

1.一种安普霉素的磁免疫化学发光检测试剂盒，包括酶标抗原、酶标抗原稀释液、磁标抗体、磁标抗体稀释液、安普霉素系列标准品溶液、化学发光底物A液、化学发光底物B液、复溶液、洗涤液；其特征在于：所述酶标抗原是辣根过氧化物酶标记的安普霉素半抗原，所述磁标抗体是免疫磁珠标记的安普霉素单克隆抗体，所述安普霉素单克隆抗体是由安普霉素半抗原与牛血清白蛋白偶联得到的偶联物作为免疫原免疫动物制备获得；所述安普霉素半抗原的合成方法为：取安普霉素1.0g，加吡啶50mL溶解，加重铬酸吡啶0.83g，80℃搅拌3h，停止反应，旋蒸，蒸干，加甲苯，旋蒸，蒸干，得到黑色油状物，上硅胶柱，体积比为5:1的二氯甲烷/甲醇洗脱分离，得到醛基安普霉素0.89g；取0.89g醛基安普霉素，加甲醇80mL溶解，加己二酸1-酰肼0.32g，加碳酸钠0.3g，室温搅拌2h，停止反应，旋蒸，除去甲醇，加水，乙酸乙酯萃取震荡，旋蒸蒸干，体积比为1:1的二氯甲烷/甲醇重结晶，得到羧酸安普霉素0.71g，即为安普霉素半抗原，其分子结构式为：

2.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述免疫磁珠表面含有—OH、—COOH或—NH₂活性基团。

3.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述化学发光底物A液为含有鲁米诺和对甲苯酚的三羟甲基氨基甲烷溶液，化学发光底物B液为含有柠檬酸、无水Na₂HPO₄和CO(NH₂)₂·H₂O₂的水溶液。

4.如权利要求1所述的试剂盒，其特征在于：所述试剂盒配套化学发光检测仪检测安普霉素的残留量。

5.一种利用权利要求1-4任一项所述的试剂盒检测安普霉素的方法，包括下列步骤：

1)将酶标抗原与酶标抗原稀释液按照1:10～1:20的体积比进行稀释，装入化学发光检测仪酶标抗原工作液容器中；

2)将磁标抗体与磁标抗体稀释液按照1:10～1:20的体积比进行稀释，装入化学发光检测仪磁标抗体工作液容器中；

3)化学发光检测仪分别吸取30～60μL酶标抗原工作液、30～60μL待测样品液和30～60μL磁标抗体工作液，依次加入到反应杯存储装置中，室温下反应15min，再通过清洗装置进行磁分离2～4min，弃上清液后用洗涤液300～500μL对复合物沉淀清洗3～5次；

4)将分离好的复合物放入测量暗箱，加入化学发光底物A液和化学发光底物B液各50μL，检测发出的相对光强度，样品中安普霉素的含量与相对光强度成负相关关系，通过相对光强度标准曲线计算安普霉素的残留量。