[发明专利]一种分离高纯度茶籽皂素单体的方法

说明书

本发明涉及天然化合物的分离纯化制备领域，具体地说是一种分离高纯度茶籽皂素单体的方法，涉及茶籽中6个高纯度五环三萜齐墩果烷型皂素的分离纯化。本发明与现有技术相比本发明的有益效果是：(a)化合物纯度较高，纯度在91‑99％；(b)分离过程简单，能同时得到茶籽中6个主要的单体皂素物质；(c)重复性好，针对性强。

技术领域

本发明涉及天然化合物的分离纯化制备领域，具体地说是一种分离高纯度茶籽皂素单体化合物的方法，涉及茶籽中6个高纯度五环三萜齐墩果烷型皂素的分离纯化。

背景技术：

茶(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)籽是除了茶叶以外的另一重要茶树资源，其含有丰富的三萜皂素，具有调节肠胃、抗菌消炎、抗肿瘤、保护神经、促进植物吸收、发泡去污等生物活性和功能，在食品、医药、农业、化工等领域具有巨大的应用前景。茶籽中皂素结构极性相近，分离制备纯品单体十分困难。单体纯品的缺乏严重阻碍了茶籽皂素定量检测方法的建立和相关生物活性机理的深入研究，限制了该物质在相关高端行业中的开发和应用。

目前对茶皂素的制备技术，多是针对油茶籽(C.oleifera)或榨取山茶油后的茶籽饼，且是对总皂素(多个皂素混合物)的提取制备方法。对于茶(C.sinensis)籽中的皂素单体分离，目前已有的技术仍然是传统的分离技术，即甲醇或乙醇提取后，用正反向硅胶柱、制备型高效液相色谱(HPLC)多次反复分离制备。其主要缺点是样品消耗量大，分离过程特别是色谱部分操作繁琐，重复性差，盲目性较大，分离效率低。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种茶(Camellia sinensis)籽皂素单体化合物的分离纯化方法，用于制备茶籽中的6个高纯度皂素类化合物Theasaponin B₅，Theasaponin E₁，Theasaponin E₄，Theasaponin G₂，Assamsaponin B，Assamsaponin G。

一种分离高纯度茶籽皂素单体的方法，包括如下步骤：

(1)茶籽去壳，烘干过筛，得到茶籽粉末；

(2)在步骤(1)的茶籽粉末加入70％-80％乙醇以1:15-20(w/v)的料液比70-80℃回流提取5-7小时，抽滤收集提取液，45℃真空旋转浓缩得浓缩液；

(3)将步骤(2)浓缩液以1:1(v/v)石油醚萃取两次，收集水相溶液；1:1(v/v)乙酸乙酯萃取两次收集水相溶液；1:1(v/v)正丁醇萃取两次收集正丁醇相；70℃真空旋转浓缩得样品。

(4)将样品上D101大孔树脂柱，静态吸附5-8小时，用20-30％乙醇和60-80％乙醇分别洗脱三个柱体积，收集70％-80％乙醇洗脱部分45℃真空旋转浓缩后冷冻干燥成粉得到总皂素；

(5)步骤(4)中收集到的总皂素在中低压色谱系统中进一步分离：采用C-18制备柱，柱温25℃，检测波长210nm，两次过柱；第一次等梯度洗脱，流动相为50％乙腈水溶液(含0.1％甲酸)，流速2.0ml/min，洗脱30min；第二次流动相：A相(0.1％甲酸/水)-B相(0.1％甲酸/乙腈)；梯度洗脱：0-15min 38％B，15-50min 40％B，流速1.5ml/min，分离得到茶籽皂素单体。

优选的，步骤(1)中茶籽去壳，60℃烘干，籽仁粉碎过20目筛。

优选的，步骤(2)在步骤(1)的茶籽粉末加入70％乙醇以1:15(w/v)的料液比70℃回流提取5小时，抽滤收集提取液，45℃真空旋转浓缩得浓缩液。

优选的，步骤(3)采用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇依次萃取两次，比例各自为1:1，并收集正丁醇相。