[发明专利]一种免疫球蛋白IgG检测试剂盒及其制备、使用方法在审
申请号: | 201711440998.7 | 申请日: | 2017-12-27 |
公开(公告)号: | CN108120839A | 公开(公告)日: | 2018-06-05 |
发明(设计)人: | 甘宜梧;胡晓飞;邵丹;罗维晓;李静;王慧娟 | 申请(专利权)人: | 山东博科生物产业有限公司 |
主分类号: | G01N33/68 | 分类号: | G01N33/68 |
代理公司: | 济南泉城专利商标事务所 37218 | 代理人: | 李桂存 |
地址: | 250200 山东省济南市*** | 国省代码: | 山东;37 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 免疫球蛋白IgG 检测试剂 试剂盒 体外检测试剂 缓冲体系 稳定性能 增强试剂 比浊法 大缺陷 血清 抗体 血浆 制备 检测 | ||
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域,特别涉及一种稳定的免疫球蛋白IgG检测试剂盒,其用于对血清或血浆中的免疫球蛋白IgG含量的检测;免疫比浊法IgG检测试剂盒在试剂稳定性能上存在很大缺陷,本发明提供一种稳定的IgG检测试剂盒通过更换缓冲体系,使抗体在此环境中更加稳定,从而增强试剂的稳定性。
技术领域
本发明涉及临床体外检测试剂技术领域,特别涉及一种免疫球蛋白IgG检测试剂盒及其制备、使用方法,其用于对血清或血浆中的免疫球蛋白IgG含量的检测。
背景技术
人体血清免疫球蛋白的主要成分是IgG,它占总的免疫球蛋白的70-75%,人体血清免疫球蛋白IgG是初级免疫应答中最持久、最重要的抗体,它仅以单体形式存在。大多是抗菌性、抗毒性和抗病毒抗体属于IgG,它在抗感染中起到主力军作用,它能够促进单核巨噬细胞的吞噬作用(调理作用),中和细菌毒素的毒性(中和毒素)和病毒抗原结合使病毒失去感染宿主细胞的能力(中和病毒)。它是唯一能通过胎盘的Ig,在自然被动免疫中起重要作用。此外,IgG 还具有调理吞噬和结合SPA等作用。
现有技术中通用的免疫球蛋白IgG检测诊断方法是免疫比浊法。该方法使用的缓冲体系是Tris-HCl。Tris-HCl缓冲液的优点是:①因为Tris碱的碱性较强,所以可以只用这一种缓冲体系配制pH范围由酸性到碱性的大范围pH值的缓冲液;②对生物化学过程干扰很小,不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。
Tris-HCl缓冲液的缺点是:温度效应大,温度变化对缓冲液pH值的影响很大,即:△pKa/℃=-0.031 ,例如:4℃时缓冲液的pH=8.4,则37℃时的pH=7.4,所以一定要在使用温度下进行配制,并在配置和使用温度下保存。这点体现在免疫球蛋白IgG检测试剂盒中就是,室温下配制的Tris-HCl缓冲液试剂盒在0℃~4℃下保存3个月以内可用,检测结果稳定性很好,但放置3个月后会发现试剂浑浊有沉淀,检测结果稳定性不好,不能再使用,需要重新配置,造成资源浪费。同时R2试剂盒中的抗体也易在温度降低时或长时间放置后出现沉淀。
因此,提供一种能够对温度变化不敏感的稳定的免疫球蛋白IgG检测试剂盒,是现有技术中亟需解决的问题。
PBS是磷酸缓冲盐溶液(phosphate buffer saline),一般作为溶剂,起溶解保护试剂的作用。它是生物化学研究中使用最为广泛的一种缓冲液,主要成分为Na2HPO4、KH2PO4、NaCl和KCl,由于Na2HPO4和KH2PO4它们有二级解离,缓冲的pH值范围很广,而NaCl和KCl主要作用为增加盐离子浓度。如有需要PBS还可以补加1 mmol/L CaCl2和0.5 mmol/LMgCl2,以提供双价阳离子。PBS缓冲液(pH7.2-7.4)的组分为:NaCl 137mmol/L,KCl2.7mmol/L,Na2HPO4 10mmol/L, KH2PO4 2mmol/L。
含0.05%吐温-20的pH7.4的磷酸盐缓冲液(简称为PBS-T)配制方法为:称取磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、氯化钠(NaCl)、氯化钾(KCl)、吐温-20,加水。PBS 1L的配方为:磷酸二氢钾0.27g,磷酸氢二钠1.42g,氯化钠8g,氯化钾0.2g,加去离子水约800mL充分搅拌溶解,然后加入浓盐酸调pH至7.4,最后定容到1L。
不仅伪狂犬病毒要用PBS稀释,一般的有活性的生物制剂都要用它来稀释。原因就是它具有盐平衡、可调整的适宜pH缓冲作用,蒸馏水不具有盐平衡作用,可以破坏生物蛋白的结构及生物特性;生理盐水不具有调整pH的作用,对完整的、具有活性的物质不能保证其在最适条件下参与生物反应,所以使用PBS是首选。
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