[发明专利]人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒，所述试剂盒包含扩增如下25个基因座的特异性扩增引物；所述基因座为：D3S1358、D13S317、D7S820、D16S539、D1S1656、PentaE、TPOX、TH01、D2S1338、CSF1PO、Penta D、D19S433、vWA、D21S11、D18S51、D6S1043、Amelogenin、D8S1179、D5S818、D12S391、FGA、D22S1045、Yindel、D2S441、D10S1248。本发明所述试剂盒具有以下优点：本发明所述试剂盒在基因座累积的鉴别能力增强的前提下，提高了灵敏度，做到DNA模板量在50pg下全部检出25个基因座，29个循环扩增，可获得完整分型；本发明基因座数量更加满足数据库建设不断扩容，并增加检测基因座的要求；试剂盒高效、稳定，提高了案件现场检材中的检出率，缩短扩增时间。

技术领域

本发明属于分子生物学领域，涉及STR分子标记，具体为一种涵盖更多基因座、个体识别能力更高的人类常染色体STR多态性位点复合扩增试剂盒及其应用。

背景技术

短串联重复序列基因座(STR)是由几个碱基对作为核心单位串联重复形成的一类DNA序列。串联重复的核心单位数目可变，因此STR具有很好的遗传多态性。关于STR，早在90年代初就已经发现。STR基因座片段小，能复合扩增，灵敏度高，可快速提供准确、丰富的信息，已被广泛应用于建立DNA数据库。在1997年，美国FBI选择了13个STR基因座：CSF1PO、D16S539、FGA、D18S51、TH01、D5S818、TPOX、VWA、D3S1358、D13S317、D7S820、D8S1179、D21S11；而在今年(2017年1月1日)FBI又公布了7个新增的STR基因座：D1S1656,D2S441,D2S1338,D10S1248,D12S391,D19S433,D22S1045和Amelogenin。这些基因座的个体识别率较高，一般被称为核心基因座。

我国对STR DNA的数据库建设逐步标准化。根据中华人民共和国公共安全最新行业标准《法庭科学DNA数据库选用的基因座及其数据结构》，其中常染色体含有20个核心基因座即Amelogenin、D18S51、D21S11、D3S1358、FGA、D8S1179、vWA、CSF1PO、D16S539、D7S820、D13S317、D5S818、D2S1338、D19S433、TH01、TPOX、D6S1043、Penta D、Penta E和D12S391，10个优选基因座D1S1656、D2S441、D22S1045、D10S1248、D8S1132、D15S659、D3S3045、D19S253、D6S477、D10S1435。其中，Amelogenin、D18S51、D21S11、D3S1358、FGA、D8S1179、vWA、CSF1PO、D16S539、D7S820、D13S317、D5S818、D2S1338、D19S433、TH01和TPOX这16个基因座DNA数据库中排序靠前，兼容性好；D6S1043、Penta D和Penta E在DNA数据库中排序靠前，中国人群遗传多态性高，识别率高；D12S391、D1S1656、D2S441、D22S1045和D10S1248是引入的NEWCODIS，由美国FBI在2017年新增的核心位点，同时在欧洲的标准(ESS)中也包含这5个基因座。

商品化的试剂盒ABI的Identifiler，Promega(USA)的PowerPlex16，到现在AB公司的含有24个基因组的AmpFeSTR global filer，和Promega包含27个STR的PowerPlexfusion。在国内，中德美联的17+1，EX20，EX27，公安部物证鉴定中心已经有了含有25个基因座的DNATyper25，基点认知的25A，海尔施的STRtyper26G等。但长期以来，国内厂商由于试剂盒的性能，比如灵敏度抗抑制能力，稳定性不如国外厂商，长期只应用于建库市场，而实际案件检材应用的均为国外厂商产品，在这块，国内试剂盒的应用一片空白。

发明内容