[发明专利]SMN基因主要转变区DNA扩增方法

说明书

本发明SMN基因主要转变区DNA扩增方法所属技术领域是医学遗传学。解决的技术问题：SMN基因主要转变区常规DNA及包含甲基化信息的DNA扩增方法。技术方案的要点：设计DNA扩增引物，引物3’端在相应的基因组内不包含核苷酸C，这样，PCR扩增可不受相应转变区末端是否潜在甲基化的影响。摸索出稳定优化的PCR反应条件。主要用途：筛查SMN基因主要转变区基因转变的分子背景的多态性位点，及DNA低甲基化与SMN基因转变潜在相关的CpG位点甲基化研究提供基础保证。对能使SMA病情相对减轻的机制研究提供前提条件，可应用于寻找基因治疗靶点。

技术领域

医学遗传学

背景技术

脊髓性肌萎缩(SMA)是最常见的常染色体隐性遗传性神经肌肉病，SMN1基因为SMA决定基因，可通 过其基因缺失和基因内微小突变致病，SMN基因存在两个高度同源的拷贝，端粒拷贝(SMN1)和着丝粒拷贝 (SMN2)，SMN2为修饰基因，在SMA个体中一些，国外发现有基因转变现象，为SMN1基因外显子8并列于 SMN2基因外显子7，即为SMN1至SMN2基因转变。含转变的杂合基因可在一定程度上弥补SMN1基因缺失 的影响，已证实基因转变可使SMN基因量增加，进一步使SMN转录物大为提高，使SMA病人症状相对较轻， 但SMN基因主要转变区SMN基因内合子7-外显子8转变区基因结构复杂，国内外研究较少，还没有较好的 该区基因扩增方法，我们总结摸索出简便，通用，经济的SMN基因主要转变区常规DNA及包含甲基化信息 的DNA扩增方法。可对SMN基因转变的分子背景，及DNA低甲基化与SMN基因转变潜在相关的CpG位 点进行甲基化研究提供基础保证。对能使SMA病情相对减轻的机制研究提供前提条件，可应用于寻找基因 治疗靶点，指导进一步治疗研究。

发明内容

我们对SMN基因主要转变区SMN基因内合子7-外显子8转变区进行DNA扩增，SMN基因DNA进行亚 硫酸氢钠处理后，在亚硫酸氢钠作用下可将基因组非甲基化的C转化为U，后者经PCR扩增变成T，但甲 基化的C则能抵抗亚硫酸氢钠的修饰，这样DNA包含的甲基化信息就可转化为DNA序列的差异，对DNA 进行亚硫酸氢钠处理后SMN基因主要转变区SMN基因内合子7-外显子8转变区再次进行DNA扩增，总结摸 索出SMN基因主要转变区常规DNA及包含甲基化信息的DNA扩增方法。该方法简便，通用，经济。可对后 续通过对SMN基因转变区DNA进行测序研究，筛查此区基因多态性(single-nucleotide polymorphism，SNP) 位点，作为重要的自发SMN基因转变的分子背景，及DNA低甲基化与SMN基因转变潜在相关的CpG位 点进行甲基化研究提供基础保证。

附图说明

图1，图例代表SMN基因转变区的PCR扩增区相应位置

图2，画虚线字母区代表相应的引物区，化横线的CG二核苷酸代表在相应SMN基因转变区的PCR 扩增区内包含的4个CpG位点，SMN基因外显子8在之后。

图3中电泳道为SMN基因主要转变区的PCR扩增产物495bp。

图4电泳道为DNA经亚硫酸氢钠处理后SMN基因主要转变区的PCR扩增产物495bp

具体实施方式

我们对SMN基因主要转变区SMN基因内合子7-外显子8转变区进行DNA扩增，见图1，SMN基因DNA 进行亚硫酸氢钠处理后，对SMN基因主要转变区SMN基因内合子7-外显子8转变区再次进行DNA扩增， 总结摸索出SMN基因主要转变区DNA扩增方法。