[发明专利]一种马铃薯GATA转录因子及其克隆方法与应用

权利要求书

1.一种马铃薯GATA转录因子，其核苷酸序列如序列表SEQ NO.1所示；所述马铃薯GATA转录因子编码的蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ NO.2所示。

2.根据权利要求1所述的马铃薯GATA转录因子，其特征在于，所述马铃薯GATA转录因子为通过PCR方法提取的。

3.根据权利要求2所述的马铃薯GATA转录因子，其特征在于，所述PCR的引物序列分别如序列表SEQ NO.3～SEQ NO.6所示。

4.一种权利要求1所述的马铃薯GATA转录因子的克隆方法，包括以下步骤：

1)克隆马铃薯GATA转录因子基因；

2)构建包括马铃薯GATA转录因子基因的表达载体；

3)利用所述的表达载体转化农杆菌；

4)使用转化的农杆菌转染马铃薯切片，诱导再生后筛选阳性马铃薯株系，将获得的阳性株系转入生根培养基获得转基因马铃薯阳性株。

5.权利要求4所述的马铃薯GATA转录因子的克隆方法，其特征在于，所述步骤1)为：提取马铃薯总RNA，使用试剂盒将mRNA反转录为总cDNA，分别使用核苷酸序列如序列表SEQNO.3～SEQ NO.6所示的引物进行PCR扩增，将扩增后的产物等体积混匀后作为模板，以SEQNO.5、SEQ NO.6为引物进行扩增，扩增产物为马铃薯GATA转录因子基因。

6.权利要求4所述的马铃薯GATA转录因子的克隆方法，其特征在于，所述步骤2)为：将步骤1)获得的马铃薯GATA转录因子基因，克隆到pMD-18T载体，使用大肠杆菌筛选阳性克隆；在扩增的马铃薯GATA转录因子基因的引物两侧分别加上NdeI/XbaI酶切位点，以马铃薯RNA为模板进行PCR扩增，并将扩增产物克隆至pMD-18T载体，获得阳性菌株后提取质粒DNA，利用NdeI/XbaI双酶切带有目的基因全长的质粒DNA，同时以NdeI/XbaI双酶切植物表达载体，将各自的酶切产物回收后以1:2的质量比例混合，连接酶连接处理后，转化大肠杆菌DH5α感受态筛选阳性克隆，获得重组表达载体。

7.权利要求4所述的马铃薯GATA转录因子的克隆方法，其特征在于，所述步骤3)为：利用步骤2)包括构建的表达载体的重组质粒转化农杆菌，筛选转化的阳性农杆菌。

8.权利要求4所述的马铃薯GATA转录因子的克隆方法，其特征在于，所述步骤4)为：将阳性农杆菌在液体培养基中培养，浸染转化马铃薯外植体，将所述马铃薯外植体在含Kan筛选的分化培养基培养后，转入生根培养基中诱导生根，完成马铃薯植株的再生，并鉴定阳性植株即得。