[发明专利]一株林可胺类通用性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用

说明书

一株林可胺类通用性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫学检测技术领域。本发明采用克林霉素氯取代衍生物作为半抗原，将半抗原通过活化酯法偶联牛血清蛋白(BSA)，得到免疫抗原，与弗氏佐剂混合均匀后，通过皮下注射免疫BALB/c小鼠；将克林霉素采用羰基二咪唑(CDI)法与鸡蛋白蛋白(OVA)偶联，作为包被抗原，用于小鼠血清以及细胞上清检测。将免疫小鼠的脾细胞通过PEG方法与小鼠骨髓瘤细胞融合，经过间接ELISA和间接竞争ELISA筛选和三次亚克隆，得到一株群选性的杂交瘤细胞株。本发明提供的细胞株对克林霉素、林可霉素和吡利霉素均具有较好的抑制，可以满足目前市场上对林可胺类多残免疫检测产品的需求。

技术领域

本发明涉及一株林可胺类通用性单克隆抗体杂交瘤细胞株及其应用，属于食品安全免疫学检测技术领域。

背景技术

林可胺类药物(lincosamides)具有抗革兰氏阳性需氧菌和革兰氏阳性或阴性厌氧菌活性，兽医临床常用的有林可霉素、克林霉素和吡利霉素。

动物源食品中林可胺类药物残留可引起肾功能障碍和革兰氏阳性菌耐药性增加，我国和欧盟都对动物源食品中的最大残留限量做了相关规定，因此，亟待建立一种快速、灵敏、准确的林可胺类药物残留检测方法，确保动物性食品的安全。

目前检测林可胺类药物残留的方法主要有高效液相色谱法(HPLC)、液质联用法(LC/MS)等仪器检测方法，而免疫分析方法相对较少。其中仪器检测方法检测准确，但仪器昂贵，操作复杂，时间长，样品前处理繁琐。免疫分析方法相对于仪器检测方法，具有低成本、高通量、高灵敏、对技术人员要求低等特点，因此适用于大量样品的快速筛查。

发明内容

本发明的目的在于提供一种林可胺类通用性单克隆抗体的制备方法，通过细胞株的筛选，得到的抗体对克林霉素、林可霉素和吡利霉素都具有较好检测灵敏度，可以用来建立林可胺类总量的免疫学检测方法。

本发明的第一个目的是提供一株单克隆细胞株，已于2017年9月5日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC No.14691，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

本发明的第二个目的是提供一种检测林可胺类药物的方法，所述方法是利用上述的单克隆细胞株分泌产生的林可胺类特异性单克隆抗体。

本发明的第三个目的是提供一种林可胺类特异性单克隆抗体，由上述的杂交瘤细胞所分泌产生。

在本发明的一种实施方式中，所述的林可胺类特异性单克隆抗体的应用是指用于食品安全检测中林可胺类药物残留的分析检测。

本发明的第四个目的是提供一种试剂盒，所述试剂盒含有所述的单克隆细胞株或者所述的林可胺类特异性单克隆抗体。

在本发明的一种实施方式中，所述试剂盒用于检测林可胺类药物。

本发明的第五个目的是提供所述的试剂盒在检测林可胺类药物中的应用。

在本发明的一种实施方式中，所述的应用包括在检测克林霉素、林可霉素或吡利霉素中的应用。

本发明的第六个目的是提供一种林可胺类通用性单克隆抗体的制备方法，所述方法步骤为：

(1)半抗原的设计：利用β-巯基丙酸与克林霉素的缩合反应制备得到，具体合成路线见图1。用20mL二甲基亚砜(DMSO)溶解9.6g克林霉素原药，加入2.3g KOH，边搅拌边缓慢滴加β-巯基丙酸溶液(3.2gβ-巯基丙酸溶解于10mLDMSO)，油浴升温至100℃，反应2h，待产物自然冷却至室温后，加入50mL水，以6mol/LHCl调反应液至pH 3，然后以50mL二氯甲烷萃取，提取液经无水Na₂SO₄干燥、浓缩、结晶，得黄色晶体，即目标化合物，通过质谱鉴定。