[发明专利]一种天然鱼肝油维生素D和A及相关物质检测方法

说明书

一种天然鱼肝油维生素D和A及相关物质检测方法，所述的检测方法是：1）取金枪鱼、鳕鱼的肝脏，洗净后，切碎，用乙酸乙酯浸泡，提取；取提取液进入高效液相色谱进行接样，接样条件是：C18,流动相：甲醇；流速：1ml/mim，柱温：30oC，检测波长：254nm，得到样品油；2）VD3，VA检测条件：a）VA醋酸酯检测条件：取上述样品油。

技术领域

本发明涉及的是一种天然鱼肝油的维生素D和A及相关物质检测方法，属于天然鱼肝油的产品质量检测技术领域。

背景技术

鱼肝油为天然提取物，其中主要成分是天然维生素A和维生素D，但是目前《中国药典》却规定可以用精炼食用植物油、浓度较高的鱼肝油或维生素A与维生素D₃调节鱼肝油至适当的药用浓度，然而维生素AD制剂又规定可以加鱼肝油或精炼食物油适当调节药用浓度。显然，由于这样的描述和规定，鱼肝油中可以含有人工合成的维生素A和维生素D，而维生素AD制剂中又会含有天然成分的维生素A和维生素D。这种“你中有我，我中有你”的描述已经在实际生产和质量控制等方面引发了混乱，产生了一些问题。

《美国药典》、《英国药典》、《欧洲药典》和《日本药局方》均收载“鱼肝油”都明确指出鱼肝油是从鳕鱼或鳕科类鱼动物肝脏中提取出的脂肪油，可适当添加抗氧剂，但是不能加入人工合成的维生素A和维生素D。但是，《中国药典》规定可用人工合成维生素A和维生素D调节药用浓度，此种方式会造成商家基本不会用成本高的天然鱼肝油，而大量采用相对廉价的人工合成维生素A和维生素D，鱼肝油实际成分变成了维生素AD油。目前市场上的国产鱼肝油基本都是采用人工合成维生素A和维生素D及植物油勾兑出来的。少量的加入鱼肝油也只是为了增加些鱼腥味。

《中国药典》2015年版鱼肝油标准中鉴别项（1）在维生素A含量测定项下记录的色谱图中，供试品溶液主峰的保留时间应与对照品溶液主峰的保留时间一致。而维生素A的含量测定法中，HPLC法只能测定人工合成的维生素A醋酸酯，并不能测定天然维生素A，质量标准存在错误。若要检测天然成分，还是采用紫外——可见分光光度法，但其波长上有干扰，严重影响测定结果。鉴别项（2）中VD₃相关鉴别是采取皂化（结构破坏）后的VD₃单体而言，这已经不是天然VD₃相关成分。

鱼肝油顾名思义应为鱼肝脏中提取出富含天然维生素A(目前已有研究表明，主要成分为维生素A棕榈酸酯等)和维生素D的一种脂肪油。而国内鱼肝油都是采用人工合成维生素A醋酸酯和维生素D配制而成。鱼肝油天然提取物少之又少，或根本没有。因此，建议鱼肝油应着重定位于天然制品，质量标准应控制的是天然成分，该品种不应也不能加入人工合成的维生素A和维生素D。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术存在的不足，而提供一种采用创新液相色谱技术鉴别天然鱼肝油和人工合成鱼肝油中主要成分，确定天然鱼肝油中维生素D和维生素A的天然存在形式、定位及百分比，为天然鱼肝油产品质量控制标准提供科学依据的天然鱼肝油的维生素D和A及相关物质检测方法。

本发明的目的是通过如下技术方案来完成的，一种天然鱼肝油维生素D和A及相关物质检测方法，其特征在于所述的检测方法是：

1）取金枪鱼、鳕鱼的肝脏，洗净后，切碎，用乙酸乙酯浸泡，提取；取提取液进入高效液相色谱进行接样，接样条件是：C18,流动相：甲醇；流速：1ml/mim，柱温：30^oC，检测波长：254nm，得到样品油；

2）VD3，VA检测条件：

a）VA醋酸酯检测条件：取上述样品油，进入高效液相色谱色谱仪，色谱条件：色谱柱SiO2柱，流动相：正己烷：异丙醇=997:3；流速：1.5 ml/min；检测波长：328nm；柱温：30^oC，检测结果：天然鱼肝油中不能检测有维生素A醋酸酯；