[发明专利]“肾主骨”组织效应的鉴定方法在审
| 申请号： | 201711449708.5 | 申请日： | 2017-12-27 |
| 公开（公告）号： | CN108179170A | 公开（公告）日： | 2018-06-19 |
| 发明（设计）人： | 胡小东;赵翔;熊华强;宋彩霞 | 申请（专利权）人： | 重庆斯德姆生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/02 | 分类号： | C12Q1/02;G01N21/31;G01N33/576;C12N5/077 |
| 代理公司： | 重庆百润洪知识产权代理有限公司 50219 | 代理人： | 刘立春 |
| 地址： | 400020 重庆*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 成骨细胞 足细胞 体外细胞培养 内在联系 细胞水平 肾小球 主骨 分泌碱性磷酸酶 成骨细胞增殖 影响因素 有效地 观察 体内 | ||
1.用体外细胞培养方式鉴定“肾主骨”效应的方法，其特征在于，用含有肾小球足细胞培养上清液的培养液培养成骨细胞，测成骨细胞的增殖和碱性磷酸酶的浓度，在细胞水平分析成骨细胞和肾小球足细胞的关系，鉴定肾主骨”效应。
2.按权利要求1所述的鉴定方法，其特征在于，该方法包括步骤：
(1)分离培养肾小球足细胞和成骨细胞；
(2)用含有肾小球足细胞培养上清液的培养液培养成骨细胞；同时以含正常血清的培养液为对照组；
(3)测定成骨细胞增殖和碱性磷酸酶浓度。
3.按权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，免疫组织化学法显示结蛋白表达呈阴性、角蛋白和WT-1表达呈阳性鉴定所述步骤(1)所得肾小球足细胞。
4.按权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(3)中，先用无血清培养液培养成骨细胞24h，然后分为正常血清组和足细胞组，正常血清组含10％的正常大鼠血清RPMI-1640培养液；足细胞组含20％的足细胞上清液的正常大鼠血清RPMI-1640培养液。
5.按权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述步骤(3)中，在酶标仪上检测成骨细胞光密度值，检测波长490nm；ELISA法测定碱性磷酸酶，在450nm处测吸光值。
6.按权利要求2所述的鉴定方法，其特征在于，所述的肾足细胞直接作用于所述的成骨细胞，促进成骨细胞增殖，和促进成骨细胞分泌碱性磷酸酶。
7.权利要求1的用体外细胞培养方式鉴定“肾主骨”效应的方法在制备成骨细胞培养液中的用途。
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