[发明专利]一种用于抗流感病毒的Fe3

权利要求书

1.一种抗流感病毒的Fe₃O₄纳米材料的应用，其特征是，该纳米材料由Fe₃O₄采用水热法合成，所述Fe₃O₄纳米材料的粒径为10-500纳米，所述流感病毒为A型流感病毒；

A型流感病毒为H3、H4、H5、H6、H7、H9亚型流感病毒，所述H5亚型流感病毒包括Clade 0、Clade 2.3.4、Clade 2.3.2.1、Clade 7.2、Clade 2.3.4.4分支毒株；

所述的抗流感病毒的Fe₃O₄纳米材料的应用，利用Fe₃O₄纳米颗粒制作抗流感病毒防护口罩，该口罩罩体由内到外依次分为八层，第一层为无纺布层，第二层为脱脂棉纱布层，第三层为Fe₃O₄纳米颗粒的脱脂棉纱布层，第四层至第七层为脱脂棉纱布层，第八层为无纺布层；

其中第三层Fe₃O₄纳米颗粒的脱脂棉纱布层的制备方法包括以下步骤：

A.称取40mg的Fe₃O₄纳米颗粒于15ml离心管中，并加入10ml的无水乙醇，然后放入超声波清洗仪中超声15min；随后用磁铁将超声过的Fe₃O₄纳米颗粒吸至离心管的底部，弃上清，再加入5ml PBS缓冲液清洗三遍，弃上清；

加入4ml的PBS缓冲液重悬被磁铁吸到管底的Fe₃O₄纳米颗粒，调整Fe₃O₄纳米颗粒的浓度为10mg/ml，该浓度为Fe₃O₄纳米颗粒的储存浓度，根据需要配置浓度为2-4mg/ml的Fe₃O₄纳米颗粒悬液；

B.将A中配置好的Fe₃O₄纳米颗粒悬液均匀滴加至第三层脱脂棉纱布中，使作用浓度达到0.1-0.8mg/cm²，随后用吹风机将纱布吹干，使Fe₃O₄纳米颗粒完全吸附至该层脱脂棉纱布上。

2.根据权利要求1中所述的一种抗流感病毒的Fe₃O₄纳米材料的应用，其特征在于所述的用于抗流感病毒的Fe₃O₄纳米材料的活性评价方法，包括以下步骤：

1)备好Fe₃O₄粉剂、M199细胞培养液、H3、H4、H5、H6、H7、H9亚型流感病毒，其中H5亚型流感病毒包括Clade 0、Clade 2.3.4、Clade 2.3.2.1、Clade 7.2、Clade 2.3.4.4分支毒株，制备1％的鸡红细胞、鸡胚成纤维细胞；

2)将Fe₃O₄粉剂采用水热法合成Fe₃O₄纳米颗粒，粒径为10-500纳米；

3)称取40mg的Fe₃O₄纳米颗粒于15ml离心管中，并加入10ml无水乙醇，然后放入超声波清洗仪中超声15min；随后用磁铁将超声过的Fe₃O₄纳米颗粒吸至离心管的底部，弃上清，再加入5ml PBS缓冲液清洗三遍，弃上清，目的为了去除未弃干净的无水乙醇；

4)加入4ml的PBS重悬被磁铁吸到管底的Fe₃O₄纳米颗粒，调整Fe₃O₄纳米颗粒的浓度为10mg/ml，该浓度为Fe₃O₄纳米颗粒的储存浓度；分别配置浓度为4mg/ml、2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.25mg/ml、0.125mg/ml的Fe₃O₄纳米颗粒悬液；

5)将上述配置好的不同浓度的Fe₃O₄纳米颗粒悬液分别与200μl的H3、H4、H5、H6、H7、H9不同亚型的流感病毒尿囊液作用2h后，检测10株流感病毒的血凝效价和组织半数感染量的变化；其中H5亚型流感病毒包括Clade 0、Clade 2.3.4、Clade 2.3.2.1、Clade 7.2、C1ade2.3.4.4分支毒株；

6)Fe₃O₄纳米颗粒的浓度为4mg/ml、2mg/m1以及1mg/ml时，可使H3亚型流感病毒的HA效价显著下降，特别是纳米颗粒在4mg/ml、2mg/ml时，病毒HA效价降为0；纳米颗粒在0.25mg/ml-4mg/ml时，可使H3亚型流感病毒的TCID₅₀滴度显著下降，特别是纳米颗粒在4mg/ml时，病毒TCID₅₀滴度降为0；

Fe₃O₄纳米颗粒的浓度为4mg/ml、2mg/ml以及1mg/ml时，可使H4亚型流感病毒的HA效价和TCID₅₀滴度显著下降，特别是纳米颗粒在4mg/ml时，病毒TCID₅₀滴度降为0；

Fe₃O₄纳米颗粒的浓度为4mg/ml和2mg/ml时，可使H6亚型流感病毒的HA效价显著下降；Fe₃O₄纳米颗粒的浓度为4mg/ml时，可使H6亚型流感病毒的TCID₅₀滴度显著下降；

Fe₃O₄纳米颗粒的浓度为4mg/ml、2mg/ml以及1mg/ml时，可使H7亚型流感病毒的HA效价和TCID₅₀滴度显著下降，特别是纳米颗粒在4mg/ml和2mg/ml时，病毒HA效价和TCID₅₀滴度均降为0；

Fe₃O₄纳米颗粒的浓度为4mg/ml、2mg/ml以及l mg/ml时，可使H9亚型流感病毒的HA效价显著下降，纳米颗粒在0.5mg/ml-4mg/ml时，可使H9亚型流感病毒的TCID₅₀滴度显著下降，特别是纳米颗粒在4mg/ml和2mg/ml时，病毒TCID₅₀滴度降为0；

不同浓度的Fe₃O₄纳米颗粒显著引起H5亚型的各分支病毒HA效价和TCID₅₀滴度不同程度的下降。