[发明专利]一种报春石斛的组织培养育苗方法

说明书

本发明公开了一种报春石斛的组织培养育苗方法，包括以下步骤：外植体的选择、外植体的消毒、播种、继代培养、生根培养、炼苗和驯化移栽。该方法结合报春石斛的分化、生长特点，选择了合适的消毒方式、光照强度、温度和培养基，以高效、经济的方式，得到了报春石斛植株，具有较好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种组织培育技术领域，尤其涉及一种报春石斛的组织培养育苗方法。

背景技术

报春石斛(Dendrobium signatum Lindl.)为兰科，主要分布在印度、缅甸、泰国、老挝、越南等国家。茎下垂，厚肉质，圆柱形，无分枝，具多节；总状花序具1-3朵花，通常从落了叶的茎节上发出，花展开下垂，萼片和花瓣淡玫瑰色，唇瓣淡黄色带淡玫瑰色先端，两面密布短柔毛，边缘具不整齐的细齿，唇盘具有紫红色的脉纹，花期3-4月。

目前国内市场上的报春石斛主要靠进口和野生采挖，有少数人工栽培，一般通过分株繁殖和扦插的方式进行繁殖，繁殖种苗较少，繁殖率低，生长周期较长，正常生长环境下不经人工授粉结果的几率较小；由于果荚少，果粉细小，在自然环境下不易萌发生长等诸多因素的制约，野生的报春石斛资源不断减少。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种存活率高的报春石斛的组织培养育苗方法。

本发明的目的采用如下技术方案实现：

一种报春石斛的组织培养育苗方法，包括以下步骤：

1)外植体的选择：选外种壳黄绿色、完好无裂的果荚作为外植体，冷藏；

2)外植体的消毒：取步骤1)得到的外植体，用洗涤液浸泡，刷净果荚表皮，洗净，在无菌环境下用医用酒精浸泡消毒，再依次采用次氯酸钠、升汞消毒，冲洗干净；

3)播种：将步骤2)消毒后的外植体解剖，取果荚中的果粉，将果粉撒至初代培养基，置于24℃-26℃、光照强度为2000-2500lx，光照时间为10-12小时/天的条件下，培养至果粉萌发；所述初代培养基为含有蔗糖和琼脂粉的1/2MS培养基；

4)继代培养：果粉萌发后，将光照强度上调400-600lx，继续培养至种苗长2-3cm，移至继代培养基，培养至种苗长5-6cm；所述继代培养基为含有萘乙酸、6-BA、蔗糖、琼脂粉、土豆汁和活性碳粉的1/2MS培养基；所述继代培养基中，萘乙酸的浓度为0.8-1.2mg/L萘乙酸；

5)生根培养：将继代培养后的种苗置于生根培养基中继续培养，所述生根培养基为含有萘乙酸、6-BA、蔗糖、琼脂粉、土豆汁、香蕉汁和活性碳粉的MS培养基；所述生根培养基中，萘乙酸的浓度为1.8-2.2mg/L萘乙酸；

6)炼苗、驯化移栽：待根充分发育后，将种苗连同生根培养基置于大棚中炼苗；将种苗取出清洗，用多菌灵稀释液浸泡，洗净阴干水分，将种苗至于基质中驯化。

进一步地，步骤1)中，选择健康的报春石斛2-4年的母本植株，人工授粉，培育，得果荚。

进一步地，步骤1)中，冷藏的具体操作为于3-6℃冷藏12-16天。

进一步地，步骤2)中，次氯酸钠的浓度为2wt％；升汞的浓度为0.1wt％。

进一步地，步骤3)中，初代培养基为含有2％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉的1/2MS培养基。

进一步地，步骤3)中，所述果粉与初代培养基的播种密度为0.08-0.12g的果粉/30mL初代培养基，所述初代培养基的pH值为5.8-6.0。

进一步地，步骤4)中，继代培养基为含有最终浓度如下所示的以下组分的1/2MS培养基：1.0mg/L的萘乙酸、1.5mg/L的6-BA、3％的蔗糖、4.8g/L的琼脂粉、35g/L的土豆汁、0.3g/L的活性碳粉；所述继代培养基的pH值为5.8-6.0。