[发明专利]一种基于超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱鉴定五常大米真伪的方法

权利要求书

1.一种基于超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱鉴定五常大米真伪的方法，其特征在于，包括如下步骤：

（1）样品预处理：取五常大米样品，磨成粉后过筛，先采用体积比98~100:1的水/甲酸溶液进行振荡提取，离心取上清液后再加入体积比95~100：2~5：1的乙醇/水/甲酸溶液进行振荡提取，离心后取上清液，得样品溶液；

（2）用超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱对所述样品溶液进行检测，获得五常大米的代谢指纹图谱数据；其中：

超高效液相色谱的色谱柱为ACQUITY UPLCHSS T3 其规格为：1.7 μm，100 mm×2.1 mm，Waters，流动相以含有0.05~0.15%甲酸的水溶液为水相、乙腈为有机相进行线性梯度洗脱；

洗脱过程具体为：0~0.25min水相的体积百分比为98%，0.25~12.25min水相的体积百分比为98%至1%，12.25~13.0min水相的体积百分比为1%；13.01~17.0 min：水相的体积百分比为98%，余量为有机相；

四级杆飞行时间质谱在ESI⁺模式下采集m/z 50~1200的信号，并同时收集化合物的母离子和碎片离子的信息，作为代谢指纹图谱数据；

（3）取非五常大米样品，按照与步骤（1）、（2）相同的方法进行预处理和检测，获得非五常大米的代谢指纹图谱数据；

（4）对步骤（2）获得的五常大米代谢指纹图谱数据以及步骤（3）获得的非五常大米代谢指纹图谱数据进行分析，确定五常大米中含有而非五常大米中不含有的化合物，作为标志性化合物；

（5）取待测样品，按照与步骤（1）、（2）相同的方法进行预处理和检测，获得待测样品的代谢指纹图谱数据；

如待测样品的代谢指纹图谱数据中包括全部所述标志性化合物的数据，且这些化合物在待测样品代谢指纹图谱中的响应值与五常大米代谢指纹图谱中相应化合物的响应值相比无显著性差异，则判断所述待测样品为五常大米；

如待测样品的代谢指纹图谱数据中未包括全部标志性化合物的数据，或包含的标志性化合物在待测样品代谢指纹图谱中的响应值与五常大米代谢指纹图谱中相应化合物的响应值相比存在显著性差异，则判断所述待测样品不是五常大米；

所述标志性化合物为：

。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述非五常大米样品的种类大于20种。

3.根据权利要求2所述的方法，所述非五常大米包括：塞外香富硒香米、太粮靓虾王香软米、方家铺子响水大米、袁隆平珍贡米、太粮马坝龙油粘米、南北通道农家乡米、金龙鱼苏北米、华润五丰盘锦大米、陕西安康富硒糙米、香满园优选珍珠香米、华润五丰苏北大米、御道府生态大米、东北石板大米、七河源长粒粳米、七河源原香米、福临门秋田小町、七河源小町米、十月稻田小町米、江西上饶万年贡米、天地粮人有机大米、亲情沂蒙人有机大米。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述样品预处理步骤中：每0.1g样品加入2~3 mL水/甲酸溶液振荡提取2次，收集上清液；再加入乙醇/水/甲酸溶液2~3 mL振荡提取2次，收集上清液。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述样品预处理具体包括：磨成粉后过50目筛，每0.1 g样品加入2~3 mL体积比99:1的水/甲酸溶液振荡提取2次，每次振荡提取10~20 min，以转速10000 rpm离心5~15 min后收集上清液；再加入体积比98:2:1的乙醇/水/甲酸溶液2~3 mL振荡提取2次，每次振荡提取10~20min，以转速10000 rpm离心5~15 min后收集上清液，过0.2 μm滤膜，得样品溶液。

6.根据权利要求1~5任意一项所述的方法，其特征在于，所述线性梯度洗脱时流动相的流速为0.45~0.6 mL·min^-1。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱的条件包括：柱温38~40℃，进样体积为1.5~3.5 μL。