[发明专利]一种复合益生菌腐熟剂及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种复合益生菌腐熟剂，其特征在于，由植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)C2，其保藏编号为CGMCCNo.14532；枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis) HM-66，其保藏编号为CGMCCNo.6733；植物乳杆菌(Lactobacillusplantarum)P-8，其保藏编号为CGMCCNo.6312和地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)BL-S，其保藏编号为CGMCCNo.6725组成。

2.根据权利要求1所述的复合益生菌腐熟剂，其特征在于，其中植物乳杆菌C2的有效活菌数≥2×10¹¹CFU/g，枯草芽孢杆菌HM-66的有效活菌数≥1×10¹¹CFU/g，植物乳杆菌P-8的有效活菌数≥2×10¹¹CFU/g，地衣芽孢杆菌BL-S的有效活菌数为≥1×10¹¹CFU/g。

3.根据权利要求2所述的复合益生菌腐熟剂，其特征在于，还包括保护剂，所述保护剂组分包括：脱脂乳粉30-35g/L，脱盐乳清粉15-20g/L，工业海藻糖15-20g/L，维生素C3-4g/L，卵磷脂0.05-0.08g/L，余量为蒸馏水，pH值7.0±0.2；所述复合益生菌腐熟剂中保护剂的重量百分含量为8-40％。

4.权利要求1-3任一项所述的复合益生菌腐熟剂的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1，将植物乳杆菌C2、枯草芽孢杆菌HM-66、植物乳杆菌P-8和地衣芽孢杆菌BL-S分别进行一级发酵，得到对应的一级种子培养液；

步骤2，将植物乳杆菌C2、枯草芽孢杆菌HM-66、植物乳杆菌P-8和地衣芽孢杆菌BL-S的一级种子培养液分别进行二级发酵，得到对应的二级种子培养液；

步骤3，将植物乳杆菌C2、枯草芽孢杆菌HM-66、植物乳杆菌P-8和地衣芽孢杆菌BL-S的二级种子培养液分别接种于不同的发酵培养基中进行三级发酵，得到对应的三级发酵培养液；

步骤4，将植物乳杆菌C2、枯草芽孢杆菌HM-66、植物乳杆菌P-8和地衣芽孢杆菌BL-S的三级发酵培养液分别离心，得到植物乳杆菌C2菌体、枯草芽孢杆菌HM-66菌体、植物乳杆菌P-8菌体和地衣芽孢杆菌菌体BL-S；

步骤5，将植物乳杆菌C2菌体、枯草芽孢杆菌HM-66菌体、植物乳杆菌P-8菌体和地衣芽孢杆菌BL-S菌体分别与保护剂溶液按质量比1：5-10混合，得到菌悬液，所述菌悬液通过冷冻干燥，分别得到植物乳杆菌C2菌剂、枯草芽孢杆菌HM-66菌剂、植物乳杆菌P-8菌剂和地衣芽孢杆菌BL-S菌剂；

步骤6，将植物乳杆菌C2菌剂、枯草芽孢杆菌HM-66菌剂、植物乳杆菌P-8菌剂和地衣芽孢杆菌BL-S菌剂按质量比1-4：1-4：1-4：2-7混合，并与稀释载体复配，得到复合益生菌腐熟剂。

5.根据权利要求4所述的复合益生菌腐熟剂的制备方法，其特征在于，所述一级种子培养液中植物乳杆菌C2的有效活菌数≥2×10⁹CFU/g，枯草芽孢杆菌HM-66的有效活菌数≥1×10⁹CFU/g，植物乳杆菌P-8的有效活菌数≥2×10⁹CFU/g，地衣芽孢杆菌BL-S的有效活菌数为≥1×10⁹CFU/g；所述二级种子培养液中植物乳杆菌C2的有效活菌数≥1×10⁹CFU/g，枯草芽孢杆菌HM-66的有效活菌数≥2×10⁹CFU/g，植物乳杆菌P-8的有效活菌数≥1×10⁹CFU/g，地衣芽孢杆菌的有效活菌数为≥2×10⁹CFU/g；所述三级发酵培养液中植物乳杆菌C2的有效活菌数≥1×10⁹CFU/g，枯草芽孢杆菌HM-66的有效活菌数≥1×10⁹CFU/g，植物乳杆菌P-8的有效活菌数≥1×10⁹CFU/g，地衣芽孢杆菌BL-S的有效活菌数为≥1×10⁹CFU/g。