[发明专利]一种KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法

说明书

本发明公开了一种KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法，该方法通过建立小鼠腹腔细粒棘球蚴早期感染模型以及原头蚴与巨噬细胞共培养体系，了解巨噬细胞M1/M2极化相关因子表达情况和转录因子KLF4水平，期望阐明细粒棘球蚴通过上调KLF4转录、抑制IκB水平进而诱导M2型巨噬细胞的极化。并在此基础上，沉默KLF4试图恢复M1巨噬细胞的活性，有效杀伤虫体。为棘球蚴病的防治和新技术开发提供实验依据和理论基础。

技术领域

本发明属于生物技术领域，涉及一种KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法。

背景技术

棘球绦虫(Echinococcus)后绦虫幼虫即棘球蚴寄生于牛、马、羊等草食动物，亦可寄生于人体引起棘球蚴病(Echinococcosis)或称包虫病(hydatid disease，hydatidosis)，为一种严重的人畜共患慢性寄生虫病。众所周知，巨噬细胞能够应对微生物和细胞因子环境信号，驱动其极化功能的表达。外界因素刺激将导致巨噬细胞表现出高度的可塑性、异质性。巨噬细胞存在一个连续的极化状态和2种不同的巨噬细胞表型，M1和M2是这种连续状态的极端。M1型巨噬细胞可有IFN-γ，TNF-α或脂多糖(LPS)诱导活化，产生多种促炎因子如IL-1β，IL-12，TNF-α高表达，IL-10低表达；M1型巨噬细胞也产生高浓度的活性氧和氮中间体，如一氧化氮(NO)，产生强大的抗菌、抗肿瘤作用，促进Th1型免疫应答。相反，M2巨噬细胞产生抗炎细胞因子IL-10，增加Arg-1的表达，与iNOS竞争同一个限制性的底物精氨酸。M2型巨噬细胞促进Th2型免疫应答，有文献报道，IL-4和IL-13诱导产生的M2巨噬细胞因子在变态反应性疾病，寄生虫疾病和组织修复中发挥重要角色。M2型标记性基因Arg-1，MR，Fizz-1及Ym1最近已被发现存在于寄生虫感染的小鼠体内。

M1和M2巨噬细胞的特性为研究早期E.granulosus感染产生免疫逃逸机制提供了重要的依据。M2巨噬细胞已被证实参与某些寄生虫感染如线虫、吸虫和绦虫。因此，更重要的是探究E.granulosus感染早期，M1/M2巨噬细胞调节的分子机制。转录因子调节巨噬细胞分化是目前研究较为热点方向。研究发现，Krüppel样因子4(Krüppel-like factor 4，KLF4)参与巨噬细胞调节。KLF4是一个真核生物锌指蛋白转录因子，属于KLF超家族一员。已有研究表明，KLF4诱导M2型巨噬细胞活化，而抑制M1型巨噬细胞的表达。

发明内容

本发明的目的在于提供一种KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法。通过建立小鼠腹腔细粒棘球蚴早期感染模型以及原头蚴与巨噬细胞共培养体系，了解巨噬细胞M1/M2极化相关因子表达情况和转录因子KLF4水平，期望阐明细粒棘球蚴通过上调KLF4 转录、抑制IκB水平进而诱导M2型巨噬细胞的极化。并在此基础上，沉默KLF4试图恢复 M1巨噬细胞的活性，有效杀伤虫体。为棘球蚴病的防治和新技术开发提供实验依据和理论基础。

其具体技术方案为：一种KLF4在细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的研究方法，包括以下步骤：

步骤1、通过体外实验探讨原头蚴对巨噬细胞极化的影响；

建立细粒棘球绦虫原头蚴与RAW264.7细胞共培养体系，分别在12,36,48,84h收集细胞和培养上清液，qRT-PCR检测KLF4，M1(TNF-α、IL-6、MCP-1)，M2(Arg-1、Fizz-1、 MR)巨噬细胞因子的表达；ELISA检测相关因子分泌的含量；

步骤2、通过体内实验探讨细粒棘球蚴感染早期对巨噬细胞极化的影响；