[发明专利]降解黄曲霉毒素B1的芽孢杆菌属菌株及其筛选和应用

说明书

本发明公开了一种降解黄曲霉毒素B1的芽孢杆菌属菌株及其筛选和应用。该菌株分类命名为阿耶波多氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)DT，保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号CGMCC 14949。处理方法包括以香豆素为唯一碳源的培养基进行菌株筛选和分离及16S rDNA鉴定；同时探究该菌发酵培养液对黄曲霉毒素B1的降解作用。通过挑取固体培养基上阿耶波多氏芽孢杆菌(Bacillus aryabhattai)单菌落接种于50mL生长培养基中，30‑40℃的条件下摇床振荡12‑24h，将其发酵培养液与浓度为2μg/mL黄曲霉毒素B1于暗处反应3‑4d，可达到82.98％的降解率。本发明筛选的阿耶波多氏芽孢杆菌对黄曲霉毒素B1有明显的降解作用，且具有高效节能、环境友好等特点，可应用于相关黄曲霉毒素脱毒剂的制备。

技术领域

本发明属于新菌种筛选技术及微生物技术领域，特别涉及一株能降解黄曲霉毒素B1的芽孢杆菌属菌株及其应用。

背景技术

黄曲霉毒素是到目前为止所发现的毒性最大的真菌毒素，其基本结构是双呋喃环和香豆素。它主要由黄曲霉、寄生曲霉等曲霉生成的次级杂环代谢产物。黄曲霉毒素是剧毒物质，具有极强的致癌性，长期摄入毒素在肝脏蓄积可引起肝癌，并引发其他器官如肾、肺、胃肠等癌变，在所有黄曲霉毒素中，黄曲霉毒素B1(AFB1)的毒性最强，已被国际癌症研究机构(International Agency for Research on Cancer，IARC)归为I级人类致癌物。黄曲霉毒素主要存在于霉变的花生、谷物、果仁和大米中。据联合国粮农组织(FAO)统计，全世界每年谷物产量的25％受到霉菌毒素不同程度的污染，特别是黄曲霉毒素的污染，其中AFBl污染最为严重为玉米，其次为稻谷和小麦。世界卫生组织(WHO)规定食品中黄曲霉毒素最高允许浓度为15μg/kg，我国在食品中真菌毒素限量GB 2761-2017中，对黄曲霉毒素B1分别在花生、玉米、大米、植物油、豆类、发酵食品以及乳制品中的限量制定了明确规定。

降低或除去食品和饲料中的黄曲霉毒素的方法主要集中在物理和化学方式。物理方法主要有光照、超声波和超高温等，但这些过程可能会受到温度、时间等因素的影响，造成食品中营养物质的破坏和损失。化学方法是添加一些物质来降解或破坏黄曲霉毒素，如添加氧化剂，铵解法和氢氧化钠法等，但这些化学物质可能会残留在食品中并且很难去除，因此常规的物理和化学方法去除食品中的黄曲霉毒素存在效果不稳定、营养成分损失大、饲料适口性差、难以规模化生产等缺点，较难广泛用于生产实践。因此，需要来建立一种安全、高效、环保的控制黄曲霉毒素污染的方法来弥补物理和化学去毒方法存在的诸多应用缺陷。

发明内容

本发明的目的在于提供一种可用于降解和去除黄曲霉毒素B1的菌株和应用方法，来克服和替代现有脱毒技术的缺点与不足，本发明为去除黄曲霉毒素提供一种新型简单易行、高效节能、特异性强的微生物处理方法，具有广阔的应用前景。

本发明以香豆素为唯一碳源的培养法对降解黄曲霉毒素B1菌株进行了筛选。

香豆素作为唯一碳源培养法：称取土壤样品加入到装有无菌生理盐水的三角瓶中，磁力搅拌振荡均匀制成悬液，将悬液转入离心管，并在3000-4000g下离心，取上清液用无菌生理盐水稀释，吸取适量稀释液涂布于香豆素固体培养基上，30-37℃下培养6-7d，待培养皿中长出菌落后，挑取单个菌落在香豆素固体培养基上进行反复分离划线，并连续三代培养获得遗传稳定性的菌株，即为所述降解黄曲霉毒素B1的芽孢杆菌属菌株。