[发明专利]一种绿色荧光的蓝细菌光敏色素荧光标记物的制备方法在审
| 申请号： | 201711458528.3 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN108148141A | 公开（公告）日： | 2018-06-12 |
| 发明（设计）人： | 王小明;宋建勋;夏坤;付卫雷;佟顺刚 | 申请（专利权）人： | 广州天宝颂原生物科技开发有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N15/70;C12N15/62 |
| 代理公司： | 广州嘉权专利商标事务所有限公司 44205 | 代理人： | 许飞 |
| 地址： | 510663 广东省广州市经*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 蓝细菌 光敏色素 藻胆蛋白 制备 荧光标记物 绿色荧光 融合蛋白 光敏色素蛋白 融合蛋白序列 发酵培养基 化学修饰剂 菌种稳定性 链霉亲和素 发酵条件 聚合形态 稳定表达 高纯度 裂合酶 微生物 筛选 基因 转化 优化 | ||
1.一种融合蛋白，其包括蓝细菌光敏色素蛋白all3691的第2个GAF结构域和链霉亲和素。
2.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：融合蛋白中还添加有亲和标记。
3.根据权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于：融合蛋白的序列为：
MGSSHHHHHHSQDPEAGITGTWYNQLGSTFIVTAGADGALTGTYESAVGNAESRYVLTGRYDSAPATDGSGTALGWTVAWKNNYRNAHSATTWSGQYVGGAEARINTQWLLTSGTTEANAWKSTLVGHDTFTKVKPSAASGSGTDDDDKAMADGILFNVVNQMRQSLDLNAIFCVVTQNIRRILDVDRVGIYQFHLDVNYEYGEFVAEDVSPAFPSALAVKVQDHCFGENYANLYKQGRICAITDVQSSEILDCHRQILAQFHVRASLVVPIMQEEELWGLLCIHQCDRPRQWEPLEMQFAQQVGAQMGIALKQTDLLIQTQK。
4.表达权利要求1或2所述融合蛋白的核苷酸序列。
5.根据权利要求3所述的核苷酸序列，其特征在于：核苷酸序列根据宿主菌进行密码子优化。
6.插入有权利要求3或4所述核苷酸序列的质粒。
7.根据权利要求5所述的质粒，其特征在于：质粒为pET Duet载体质粒，核苷酸序列通过酶切位点BamHⅠ、EcoRⅠ插入pET Duet载体质粒的多克隆位点1。
8.一种融合蛋白的制备方法，包括如下步骤：
1)根据权利要求1或2所述融合蛋白的序列，设计得到融合蛋白基因序列；
2)将融合蛋白基因序列插入到质粒中，得到融合蛋白质粒；
3)将融合蛋白质粒和表达藻红胆素合成的相关基因：血红素氧化酶基因ho1，胆绿素还原酶基因pebS的质粒共转入大肠杆菌，得到基因工程菌；
4)使用三级接种方法在培养基中接种基因工程菌，37℃发酵培养至生长前期；
5)降温至20℃，培养0.8～1.2h；
6)升温至25℃，加入终质量浓度为1.3～1.6％的乳糖诱导培养14～16h；
7)收集菌体提取、纯化得到融合蛋白。
9.根据权利要求8所述的制备方法，其特征在于：发酵培养基的质量组成为：蛋白胨1％，酵母粉0.5％，氯化钠1％，甘油0.4％，0.004％～0.04％猪血球蛋白粉或血红素，余量为水，pH值调至7.2。
10.根据权利要求8或9所述的制备方法，其特征在于：加入终质量浓度为1.5％的乳糖诱导培养。
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