[发明专利]自表达CD47抗体的间皮素特异性CAR-T细胞及其用途

权利要求书

1.一种T细胞，所述T细胞：(1)含有识别间皮素抗原的嵌合抗原受体的编码序列和CD47抗体的编码序列；和/或(2)表达识别间皮素抗原的嵌合抗原受体和CD47抗体；

优选地，所述T细胞的基因组中整合了识别间皮素抗原的嵌合抗原受体的表达框和CD47抗体的表达框。

2.如权利要求1所述的T细胞，其特征在于，从N端到C端，所述嵌合抗原受体依次含有任选的信号肽、抗间皮素近膜端的单链抗体、长50个氨基酸残基以上的铰链区、跨膜区、胞内共刺激信号域和胞内信号域。

3.如权利要求2所述的T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体具有以下一项或多项特征：

所述信号肽为CD8信号肽、CD28信号肽、CD4信号肽或轻链信号肽；更优选地为轻链信号肽；优选地，所述轻链信号肽的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第1-20位氨基酸残基所示；

所述单链抗体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第21-270氨基酸残基所示；

所述长50个氨基酸残基以上的铰链区选自CD8α铰链区、IgD铰链区、IgG1 FcCH2CH3铰链区和IgG4 Fc CH2CH3铰链区；优选地，所述铰链区是CD8α铰链区或IgG4 Fc CH2CH3铰链区；更优选地，所述IgG4 Fc CH2CH3铰链区的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第271-498位氨基酸残基所示；

所述跨膜区为CD28跨膜区、CD8跨膜区、CD3ζ跨膜区、CD134跨膜区、CD137跨膜区、ICOS跨膜区和DAP10跨膜区中的一种；优选为CD8跨膜区，优选其氨基酸序列如SEQ ID NO:1第499-526位氨基酸残基所示；

所述胞内共刺激信号域包括共刺激信号分子的胞内结构域，包括CD28、CD134/OX40、CD137/4-1BB、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶、诱导性T细胞共刺激因子(ICOS)和DNAX激活蛋白10的胞内结构域；优选地，所述胞内共刺激信号域为CD28的胞内结构域；优选地，所述CD28的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第527-567位氨基酸残基所示；和

所述胞内信号域为CD3ζ胞内信号域或Fcε RIγ胞内信号域；优选为CD3ζ胞内信号域，优选地所述CD3ζ胞内信号域的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第568-679位氨基酸残基所述。

4.如权利要求2或3所述的T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体具有以下一项或多项特征：

所述信号肽的编码序列如SEQ ID NO:4第1-60位碱基所示；

所述单链抗体的编码序列如SEQ ID NO:4第61-810位核苷酸序列所示；

所述铰链区的编码序列如SEQ ID NO:4第811-1494位碱基序列所示；

所述跨膜区的编码序列如SEQ ID NO:4第1495-1578位碱基所示；

所述胞内共刺激信号域的编码序列如SEQ ID NO:4第1579-1701位碱基所示；

所述胞内信号域的编码序列如SEQ ID NO:4第1702-2037所示。

5.如权利要求1或2所述的T细胞，其特征在于，所述嵌合抗原受体从N端到C端依次含有轻链信号肽、抗间皮素Region III的单链抗体、IgG4 Fc CH2CH3铰链区、CD8跨膜区、CD28胞内结构域和CD3ζ的酪氨酸活化基序；

优选地，所述嵌合抗原受体的氨基酸序列如SEQ ID NO:1第21-679位氨基酸残基所示；优选地，所述嵌合抗原受体的编码序列如SEQ ID NO:4第61-2037位碱基所示。