[发明专利]一种尾矿库重金属污染的微生物修复方法

权利要求书

1.一种尾矿库重金属污染的微生物修复方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）将硫酸盐还原菌EM2、SRB-4的菌种分别接种到富集培养基I中，35℃静止培养2-7天；

2）将铁离子还原菌Biometek-A的菌种接种到富集培养基II中35℃静止培养2-7天；

3）将富集培养的多种硫酸盐还原菌EM2、SRB-4和铁离子还原菌Biometek-A各按1%的比例接种到扩大培养基中35℃下进行静止培养2-10天，得到混合菌液；

4）将混合菌液接种到尾矿库中，反应4-6周；

其中，所述硫酸盐还原菌EM2的分类命名为：Desulfovibrio vulgaris EM2，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址为：中国 武汉 武汉大学，保藏日期为：2017年11月1日，保藏编号为：CCTCC No. M2017645；

所述硫酸盐还原菌SRB-4的分类命名为Uncultured sulfate-reducing bacteriumSRB-4，保藏单位为：中国典型培养物保藏中心，地址为：中国 武汉 武汉大学，保藏日期为：2015年9月14日，保藏编号为：CCTCC No. M2015535；

所述铁离子还原菌Biometek-A的分类命名为：脂环酸杆菌（Alicyclobacillus sp.）Biometek-A，保藏单位为：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：中国北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，保藏日期为：2012年12月26日，保藏编号为：CGMCC No. 7038；

步骤1）所述富集培养基I的配方为：(NH₄)₂SO₄ 0.45g/L，MgSO₄·7H₂O 0.50g/L，KCl0.05g/L，Ca(NO₃)₂·5H₂O 0.02g/L，葡萄糖2.50g/L，KH₂PO₄ 10.00g/L，Na₂HPO₄ 1.00g/L；

步骤2）所述富集培养基II的配方为：溶液A：MgSO₄·7H₂O 0.50g/L，(NH₄)₂SO₄ 0.40g/L，K₂HPO₄ 0.20g/L，K₂S₄O₆ 0.15g/L，KCl 0.10g/L，MnSO₄·H₂O 0.01g/L，酵母提取物0.20g/L，调整pH值到1.8-2.5，湿热121℃灭菌30min；溶液B：FeSO₄·7H₂O 20.00g溶解到0.2mol/LH₂SO₄溶液中，定容到100ml，0.2μm的硝酸纤维素滤膜过滤除菌；将灭菌的溶液A冷却到50℃和除菌后的溶液B等体积混合；

步骤3）所述扩大培养基的配方为：(NH₄)₂SO₄ 1-5g/L，KCl 0.1-0.5g/L，K₂HPO₄ 0.5-5g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5-5g/L，Ca(NO₃)₂ 0.01-1g/L，葡萄糖0-5g/L；

步骤4）所述混合菌液喷洒量为100-500L/t。