[发明专利]快速制备桑格测序模板的方法有效
| 申请号： | 201711460204.3 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN109971825B | 公开（公告）日： | 2020-11-10 |
| 发明（设计）人： | 樊隆;周敬波;蒋浩君;刘家栋;吴政宪 | 申请（专利权）人： | 南京金斯瑞生物科技有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/6806 | 分类号： | C12Q1/6806;C12Q1/6869 |
| 代理公司： | 北京坤瑞律师事务所 11494 | 代理人： | 封新琴 |
| 地址： | 211100 江苏*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 快速 制备 桑格测序 模板 方法 | ||
1.一种快速制备桑格测序模板的方法，其包括下述步骤：对包含环状DNA的样本进行变性处理；对变性产物进行滚环扩增；用通过碱性磷酸酶处理滚环扩增产物去除其中残余的dNTP，其中在开始变性处理之前将样本与用于滚环复制的随机引物混合；变性处理包括将样本加热到95℃保持3分钟，然后降温到4℃并保持；变性处理的体系中含有浓度为0.04 mM的EDTA；其中滚环扩增的反应体系含有浓度为0.5-1.5 U/μL的phi29 DNA聚合酶；其中滚环扩增的反应体系中含有浓度为75 mM的KCl；其中碱性磷酸酶处理包括在0.01-0.1 U/μL的虾碱性磷酸酶的存在下，在37℃处理滚环扩增产物30分钟； 其中滚环扩增包括在30℃的温度下等温扩增3小时； 其中按照该方法的制备全过程在4个小时之内完成。
2.根据权利要求1所述的方法，其中滚环扩增的反应体系中含有浓度为0.1 mg/mL的牛血清白蛋白。
3.根据权利要求1所述的方法，其中phi29 DNA聚合酶浓度为0.5 U/μL或1.0 U/μL。
4.根据权利要求1所述的方法，其中碱性磷酸酶处理包括在0.05 U/μL的虾碱性磷酸酶的存在下，在37℃处理滚环扩增产物30分钟。
5.一种桑格测序方法，其包括：用根据权利要求1-4中任一项所述的方法制备待测序的样本，并直接对该样本进行桑格测序。
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