[发明专利]基于血清标志物MMP-7的胆道闭锁诊断试剂盒

说明书

本发明涉及一种基于血清标志物MMP‑7的胆道闭锁诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包括抗人MMP‑7单克隆抗体包被的酶标板、阴性对照液、阳性对照液、酶标试剂、酶底物溶液、封闭液、样品稀释液、洗涤液和终止液；与现有技术相比，本发明提供了一种新的灵敏、安全、可靠、易操作的商品化试剂盒，定量测定人血清中MMP‑7的水平，有助于早期诊断BA；提供的血清生物标志物蛋白质MMP‑7诊断BA的敏感性为100％，特异性为95.6％，具有高特异性和高敏感性的特点；提高BA的早期诊断率，减少误诊，提高BA自身肝脏生存率。

技术领域

本发明涉及生物检测领域，具体涉及一种基于血清标志物MMP-7的胆道闭锁诊断试剂盒。

背景技术

胆道闭锁(Biliary atresia，BA)是以肝外胆管进行性炎症、快速肝纤维化为特征的新生儿胆汁淤积性疾病，疾病进展迅速，3月以内行Kasai手术(肝门空肠吻合术)效果较好。该疾病在西方国家的发生率为1/17000-1/19000，而在台湾地区、日本为1/7000-1/13000，大陆地区的发生率为1/5000-1/12000^[1-6]，是小儿肝移植最常见病因[2,7,8]。

现有的BA筛查和诊断血清学指标包括：①血清总胆红素，直接胆红素；其作为最初筛查指标。新生儿血清总胆红素>2.0mg/dL(42–51μmol/L)，或直接胆红素>1.0mg/dL(17μmol/L)需进行BA排查，但对于诊断BA特异性差；②GGT：大样本调查研究表明，不同年龄组中，BA组GGT含量均明显高于其他胆汁淤积疾病组^[9]。Liu等人^[10]报道GGT>300U/L时，其诊断BA的精确度为60％-85％诊断。GGT是胆道闭锁最常用的筛查指标，但临床病例中不同患儿之间差异较大，准确性受到局限；③其他指标：血清胆酸、凝血酶原浓度、血小板测定影响因素较多。影像学检查中，异常胆囊(胆囊缩小，收缩差)和肝门部纤维块是超声检查胆道闭锁患儿肝脏的特征性表现^[11,12]，但肝门部纤维块不一定在每个患儿中均出现，并且超声检查因不同医生、机器等观察结果差异较大。因此文献中报道诊断BA的敏感性与特异性各不相同^[10,13-19]。近期，有Meta分析报道，胆囊闭锁和肝门部纤维块的特异性均可达到99％，然而相对应的敏感性为28％和80％^[10]。其它检查虽然可以给胆道闭锁的诊断提供一些线索，但受到不同程度的限制。如十二指肠肠液检测操作困难；放射性核素检查可不同程度加重患儿梗阻性黄疸^[2,20]；3个月龄以内的婴儿胆管直径小、胆管内液体少^[21]，磁共振胰胆管成像检查诊断胆道闭锁的高假阳性率不可避免。此外，BA的病理特征为小胆管增生、胆栓形成、毛细胆管和肝细胞胆汁淤积、汇管区或小叶周围纤维化，早期尚可见肝小叶结构^[1,20,21]。而α1抗胰蛋白酶缺乏疾病的病理表现与之重叠，偶尔Alagille综合症、囊性纤维化、全胃肠外营养相关的胆汁淤积也可表现为相似的病理改变^[1]。因此，临床应用于鉴别BA与其他新生儿胆汁淤积症时，因检测准确性低或过程复杂导致BA诊断和治疗的延迟。

疾病早期，BA的临床表现、生物化学指标、影像学和组织学特征与其它胆汁淤积疾病存在重叠性，鉴别诊断过程曲折、复杂，容易导致诊断延迟。因此探索简单、特异性诊断方法从未停止。以往研究显示基质金属蛋白酶7(Matrix metalloproteinases-7，MMP-7)在慢性肝脏疾病中与肝纤维化形成有关^[22]。最近发现MMP-7可激活BA胆管上皮先天性免疫反应并参与胆管的炎性损伤^[23-25]。本项目通过病例对照研究MMP-7在BA患儿血清和肝内胆管组织中的表达情况，证明血清MMP-7水平在胆道闭锁诊断中具有应用价值。

参考文献