[发明专利]一种MSGV重组载体及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种MSGV重组载体及其制备方法和应用，所述重组载体包括由TRGC基因、TRDC基因和CD3ζ基因组成的基因片段。本发明采用γδTCR的胞外C区和CD3ζ的跨膜区和胞内区替换MSGV载体上的αβTCR的C区，显著降低了外源TCR分子与内源TCR的错配率。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，涉及一种MSGV重组载体及其制备方法和应用。

背景技术

近年来，利用基因工程修饰的T细胞(如CAR-T、TCR-T)进行过继性免疫治疗已取得突破性进展，例如利用CD19CAR-T进行白血病治疗，90％的急性淋巴细胞白血病患者得到完全缓解(S.L.Maude et al.Chimeric antigen receptor T cells for sustainedremissions in leukemia.Engl.J.Med.,371,1507-1517(2014))。然而，基于T细胞的免疫治疗面临着脱靶效应和细胞因子释放综合症等安全问题。造成TCR-T脱靶的原因，一方面是由于所选择的TCR分子可以识别非靶蛋白的抗原肽，另一方面是由于外源TCR分子与内源TCR分子发生错配产生杂合TCR，导致移植物抗宿主病(GvHD)的发生。

目前，研究者已提出多种避免TCR基因错配的方法，包括引入二硫键、密码子优化、TCR C区替换、Knob-into-hole、单链TCR、αβTCR转入γδT细胞、融合信号分子CD3ζ\CD3ε\CD28等。但是这些方法在提高安全性、降低错配率上的效果不尽人意。

因此，需要提出一种更为有效的避免TCR基因错配的方法。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供一种MSGV重组载体及其制备方法和应用，用于降低外源TCR分子与内源TCR分子发生错配的几率。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种重组载体，所述重组载体包括由TRGC基因、TRDC基因和CD3ζ基因组成的基因片段。

本发明中，采用γδTCR的胞外C区和CD3ζ的跨膜区和胞内区替换MSGV载体上的αβTCR的C区，显著降低了外源TCR分子与内源TCR的错配率。

本发明中，TRGC基因表示γTCR的胞外C区基因，TRDC基因表示δTCR的胞外C区基因，CD3ζ基因表示CD3ζ的跨膜区和胞内区基因。

优选地，所述基因片段还包括连接肽。

优选地，所述连接肽为P2A连接肽。

优选地，所述重组载体为MSGV载体。

本发明中，所述MSGV载体为逆转录病毒载体MSGV，具有αβTCR的C区核酸序列TRAC和TRBC。

优选地，所述基因片段包括顺次连接的TRGC基因、CD3ζ基因、P2A连接肽基因、TRDC基因和CD3ζ基因。

优选地，所述TRGC基因的核酸序列如SEQ ID NO.1所示；

SEQ ID NO.1所示的核酸序列为：