[发明专利]含ACSL1基因用于提高吐鲁番黑羊肉质性状的检测试剂盒在审
| 申请号： | 201711461334.9 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN108192980A | 公开（公告）日： | 2018-06-22 |
| 发明（设计）人： | 刘武军;方丽君;方超;马海玉;赵国艺;刘玲玲;于茜;褚洪忠 | 申请（专利权）人： | 新疆农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6888 | 分类号： | C12Q1/6888;C12N15/11 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 830011 新疆维吾尔*** | 国省代码： | 新疆;65 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 羊肉 检测试剂 品种资源 性状 基因 荧光定量PCR检测 基因表达量 特异性引物 样本基因组 脂肪酸 反向引物 关联分析 人工设计 生产水平 正向引物 重要意义 高品质 黑羊 绵羊 填补 应用 开发 研究 | ||
1.ACSL1基因用于提高吐鲁番黑羊肉质性状的检测试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒通过以下共建体系建成获得：
（1）设计引物对：利用绵羊ACSL1基因的mRNA序列（GenBank登录号：ACSL1: NC_019483.2），自行人工设计特异性引物；
（2）PCR反应试剂：Mix、上下游引物、cDNA模板和水。
2.如权利要求1所述含ACSL1基因用于提高吐鲁番黑羊肉质性状的检测试剂盒，其特征在于，所述的特异性引物序列如下所示：上游引物F：5'-TCGCAGTGGCATCATTAG-3'；
下游引物R：5'-ACTCGGTCTGTCCGTAGC-3'。
3.一种如权利要求1所述含ACSL1基因用于提高吐鲁番黑羊肉质性状的检测试剂盒的应用，其特征在于，包括以下步骤：
（1）吐鲁番黑羊背最长肌、臂三头肌和股四头肌RNA提取：采取吐鲁番黑羊背最长肌、臂三头肌和股四头肌组织样3-5mg，提取RNA，在-80℃保存；反转录为cDNA，用内参基因ACTB进行PCR扩增，1%琼脂糖凝胶电泳检测，经溴化已锭染色后，于凝胶成像仪紫外灯下照射，观察条带的大小和亮度，判断cDNA的提取及转录质量；
（2）ACSL1基因PCR扩增：根据设计的引物，特异性扩增ACSL1基因；特异性扩增的PCR产物均由1%琼脂糖凝胶电泳检测，经溴化已锭染色后，于凝胶成像仪紫外灯下照射，观察扩增带的大小和亮度，判断PCR产物扩增质量；
（3）荧光定量PCR检测：在96孔板中分别加入一下荧光定量PCR反应体系：2.5×RealMasterMix(SYBR Green) 10μl，上下游引物各0.4μl，cDNA模板1.5μl，加水至总体积20μl；整个反应在BIO-RAD荧光定量PCR序列扩增仪中进行，循环条件为95℃预变性30s；95℃变性5s；60℃退火30s共40个循环；最后在95℃10s、65℃5s、94℃5s，作熔解曲线。
4.如权利要求3所述含ACSL1基因用于提高吐鲁番黑羊肉质性状的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述的PCR扩增的反应体系为：
Mix 10.0μl，上下游引物各0.4μl，cDNA模板1.5μl，加水至总体积20μl。
5.如权利要求3所述含ACSL1基因用于提高吐鲁番黑羊肉质性状的检测试剂盒的应用，其特征在于，所述的PCR扩增的反应程序：
94℃预变性5min，94℃变性30s、退火温度30s、72℃延伸1min，循环31次，72℃延伸5min，4℃保存。
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