[发明专利]中空介孔碳固定化漆酶及其制备方法

权利要求书

1.一种中空介孔碳固定化漆酶的制备方法，包括以下步骤：

将中空介孔碳加入到含有漆酶和鼠李糖脂的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中，所述含有漆酶的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液的pH为4.5～5.5，鼠李糖脂浓度为10～20mg/L，漆酶浓度为1.0～1.8mg/mL，所述中空介孔碳与含有漆酶的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液的用量比为100mg∶100～200mL，在25～30℃、150～200rpm下恒温振荡固定化2～3h，得到中空介孔碳固定化漆酶；所述中空介孔碳固定化漆酶以中空介孔碳为载体，漆酶直接物理吸附在中空介孔碳的中空内腔；所述中空介孔碳的孔径主要分布在2～40nm，平均孔径达到11.8nm。

2.一种中空介孔碳固定化漆酶的制备方法，包括以下步骤：

（1）将质量分数为25%的氨水和中空介孔碳混合，所述中空介孔碳与氨水的用量比为100mg∶50～70mL，在200℃下水热反应12h，得到氨基化中空介孔碳；

（2）将氨基化中空介孔碳加入到质量浓度为5～10%的戊二醛溶液中，所述氨基化中空介孔碳与戊二醛溶液的用量比为100mg∶5～10mL，在室温下搅拌20～24h，得到连接戊二醛的氨基化中空介孔碳；

（3）将连接戊二醛的氨基化中空介孔碳加入到含有漆酶和鼠李糖脂的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液中，所述含有漆酶的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液的pH为4.5～5.5，鼠李糖脂浓度为10～20mg/L，漆酶浓度为1.0～1.8mg/mL，所述连接戊二醛的氨基化中空介孔碳与含有漆酶的柠檬酸-柠檬酸钠缓冲溶液的用量比为100mg∶100～200mL，在25～30℃、150～200rpm下恒温振荡固定化2～3h，得到中空介孔碳固定化漆酶；

所述中空介孔碳固定化漆酶以中空介孔碳为载体，漆酶利用戊二醛，通过共价交联固定在中空介孔碳的中空内腔；所述中空介孔碳的孔径主要分布在2～30nm，平均孔径达到13.5nm。

3.根据权利要求1或2所述的中空介孔碳固定化漆酶的制备方法，其特征在于，所述中空介孔碳由以下方法制得：

以正硅酸丙酯、无水乙醇、氨水、间苯二酚和甲醛为原料，自组装形成介孔碳球前体；然后碳化，脱硅，离心，得到中空介孔碳。

4.根据权利要求3所述的中空介孔碳固定化漆酶的制备方法，其特征在于，所述介孔碳球前体的具体制备过程为：将正硅酸丙酯加入到无水乙醇和超纯水的混合溶液中，再加入氨水，室温下搅拌15～20 min；再加入间苯二酚和甲醛，室温下持续搅拌20～24h，离心，漂洗，干燥，粉碎，得到介孔碳球前体。

5.根据权利要求4所述的中空介孔碳固定化漆酶的制备方法，其特征在于，所述氨水的质量分数为25%，所述正硅酸丙酯、无水乙醇、氨水、间苯二酚和甲醛的用量比为34.6mL∶600～700mL∶30mL∶4.0g∶5.6mL。

6.根据权利要求5所述的中空介孔碳固定化漆酶的制备方法，其特征在于，所述碳化温度为700℃，碳化时间为4～5h。

7.根据权利要求6 所述的中空介孔碳固定化漆酶的制备方法，其特征在于，所述脱硅介质为质量分数为10～20%的氢氟酸溶液，脱硅时间为20～24h。