[发明专利]检测PD‑1敲除的或低表达的T细胞对肿瘤细胞杀伤性的方法在审
| 申请号： | 201711466651.X | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN107904282A | 公开（公告）日： | 2018-04-13 |
| 发明（设计）人： | 吴海涛;聂慧蓉;沈政;施念;吴灵 | 申请（专利权）人： | 北昊干细胞与再生医学研究院有限公司 |
| 主分类号： | C12Q1/66 | 分类号： | C12Q1/66;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 广州华进联合专利商标代理有限公司44224 | 代理人： | 万志香 |
| 地址： | 510630 广东省广州市黄埔区*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 检测 pd 表达 细胞 肿瘤 杀伤性 方法 | ||
1.一种检测PD-1敲除的或低表达的T细胞对肿瘤细胞杀伤能力的方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)对待检测的肿瘤细胞进行处理，得到稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的肿瘤细胞系；
(2)取正在培养的稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的肿瘤细胞系，用胰酶消化，终止消化后，离心重悬；
(3)设置检测组和对照组，检测组中，将PD-1基因敲除的或PD-1基因低表达的T细胞，加入到步骤(2)重悬后的肿瘤细胞系中，共孵育12-20个小时；对照组中，以PD-1基因未敲除的或PD-1基因高表达的T细胞，进行上述相同操作；
(4)孵育完成后，加入荧光素底物，振荡混匀后，立即使用化学发光酶标仪检测肿瘤细胞的化学发光强度。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤(1)中，对待检测的肿瘤细胞，电转PGL4.51-luciferase-GFP质粒和Plenti-puro-PD-L1质粒，电转后得到稳定表达荧光素酶和绿色荧光蛋白的肿瘤细胞系。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述荧光素酶为萤火虫荧光素酶，荧光素酶底物为D-荧光素钾盐。
4.根据权利要求1-3任一所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，所述PD-1基因敲除的或PD-1基因低表达的T细胞与重悬后的肿瘤细胞共培养中，效靶比为1:1—1:20。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，步骤(3)中，设有三个检测组，其效靶比分别为1:1，1:10，1:20。
6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)在酶标板中进行。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述酶标板的每孔中检测1万个左右的肿瘤细胞。
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