[发明专利]一种诱导向胆管细胞分化的方法及其专用培养基在审
| 申请号： | 201711466727.9 | 申请日： | 2017-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN108251350A | 公开（公告）日： | 2018-07-06 |
| 发明（设计）人： | 王健;熊华强;宋彩霞;胡小东;黄启程 | 申请（专利权）人： | 重庆斯德姆生物技术有限公司 |
| 主分类号： | C12N5/071 | 分类号： | C12N5/071 |
| 代理公司： | 重庆百润洪知识产权代理有限公司 50219 | 代理人： | 刘立春 |
| 地址： | 400020 重庆*** | 国省代码： | 重庆;50 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 胆管细胞 细胞 形态发生蛋白 专用培养基 活性表皮 高表达 分化 诱导多能干细胞 表皮形态发生 应用前景广阔 多能干细胞 蛋白基因 胎牛血清 体外诱导 诱导分化 培养基 青霉素 饲养层 新途径 缬氨酸 阻滞 接种 诱导 生长 | ||
【权利要求书】：
1.用于体外诱导多能干细胞分化为胆管细胞的培养基，是在RPMI1640培养基的基础上添加了2.3％(V/V)胎牛血清，2.7％(V/V)B27，0.2mol/L缬氨酸，1％(V/V)青霉素。
2.一种体外诱导多能干细胞分化为胆管细胞的方法，包括以下步骤：
1)将表皮形态发生蛋白基因导入进SW86细胞，得到高表达活性表皮形态发生蛋白的SW86细胞；
2)将高表达活性表皮形态发生蛋白的SW86细胞作为饲养层并进行生长阻滞处理后接种hPSC细胞，用权利要求1所述的体外诱导多能干细胞分化为胆管细胞的专用培养基在37℃、5％CO2下共培养，得到胆管细胞。
3.根据权利要求2所述的诱导方法，其特征在于：所述步骤1)中通过含有表皮形态发生蛋白基因的重组真核表达载体或利用慢病毒载体系统或利用脂质体转染法将表皮形态发生蛋白基因导入SW86细胞。
4.根据权利要求2所述的诱导方法，其特征在于：所述步骤2)中对高表达活性表皮形态发生蛋白的SW86细胞进行生长阻滞处理的方法为：将贴壁后的高表达活性表皮形态发生蛋白的SW86细胞用浓度为15-20μg/ml的丝裂霉素在37℃、5％CO2下处理细胞1h。
5.用权利要求2-4任一项所述方法诱导得到的胆管细胞。
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